应对春季水温变化，提高草鱼抗应激能力

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应对春季水温变化，提高草鱼抗应激能力

春季气温回暖，水产生产进入旺季。同时春季气温变化幅度较大，水体冷热变换迅速，导致草鱼应激较大，抗病力变差，饵料系数升高。研究发现，应激导致血清中皮质醇含量升高，皮质醇具有抑制免疫系统发挥作用的功效。所以降低血清中皮质醇含量，可有效抵抗水温冷热变换带来的应激。胆汁酸做为一种中草药提取物、绿色饲料添加剂，额外给草鱼饲料中添加胆汁酸可有效降低皮质醇的含量，达到提高草鱼抗应激能力的效果。

1 材料与方法

1.1 试验饲料

以鱼粉、麦麸、豆粕、菜粕等原料，配制成草鱼鱼种常规配合颗粒饲料作为对照组饲料，在对照组饲料原料中分别添加0、300mg/kg乳能（20%胆汁酸，山东sh龙昌动物保健品有限公司提供）配成2种试验饲料。胆汁酸实际添加水平为0、60mg/kg。饲料组成及营养成分见表1。所有原料粉碎后过80目筛，各原料按配比称量后混匀，加适量水混合均匀，经小型绞肉机制成直径为2 mm的颗粒，于常温条件下风干，储存于-4℃的冰箱中。

1.2试验用鱼

养殖试验在山东省淡水水产研究所养殖试验场进行，试验所用的草鱼由山东省淡水研究所养殖试验场提供，初始体质量为11.49±0.82g。试验共分两个处理，每个处理设三个重复。正式试验前，草鱼在条件相同的其他水族箱用普通草鱼配合饲料驯养4周，然后，随机分组，每组放养30尾，分别放于400L的养殖桶中进行试验。养殖采用流水饲养，每天8:00～9:00，12:00～13:00，16:00～17:00投饲，日投饲量是鱼体质量的1％～3％，每两周称一次鱼体质量，并调整投饲量。每天18:00清除桶底的草鱼排泄物。养殖试验持续10周。养殖水温为（22±3）℃，pH为7.0±0.4，溶解氧不低于5.0 mg/L。

表1 草鱼基础饲料组成及营养成分

成分	含量/%	营养成分	含量/%
鱼粉	4	水分	7.86
豆粕	21	粗蛋白	28.79
菜粕	20	粗脂肪	4.09
棉粕	8
次粉	24
麦麸	18
大豆油	2
磷酸二氢钙	2
维生素预混料	0.2
矿物盐预混料	0.8

注：预混料向每千克日粮提供：VA 6000IU, VD 2000IU, VE 50mg, VK 5mg, VB1 15mg, VB2 15mg, VB3 25mg, VB5 30mg, VB6 10mg, VB7 0,2mg,VB11 3mg, VB12 0.03mg, VC 100mg; Zn 80mg, Fe 150mg, Cu 4mg, Mn 20mg, I 0.4mg, Co 0.1mg, Se 0.1mg, Mg 100mg

1.3 生产性能的测定

养殖试验结束时，试验鱼饥饿24 h，将鱼从养殖桶中捞出称鱼体质量。生长指标采用下面的公式计算：

增重率/% =（终末鱼体质量-初始鱼体质量）/初始鱼体质量╳100；

饲料系数 =饲料总消耗量/鱼体总增重；

1.4 运输应激

生长试验结束后，从每个养殖桶中随机捞取5尾草鱼，迅速放入200mg/L MS-222中，在30s内深度麻醉(不影响血清皮质醇含量的测定)，分别采集血样用于基础皮质醇水平测定。运输应激：每组用自制塑料袋网捞取草鱼10尾放入盛水15L的塑料袋中，充入纯氧，打包，用皮卡车运输6h，共运输6包，60尾鱼。运输结束后统计成活率。

1.5 血清皮质醇含量测定

草鱼血清中皮质醇参照Picketind方法用放射免疫法(RIA)进行测定。每组取8尾鱼进行尾静脉取血，并将鱼血在4000 r/min条件下离心10 min以提取血清，用于皮质醇含量的测定。试剂盒采购自南京建成生物技术有限公司。

1.6数据处理

采用SPSS 13.0统计软件中独立样本T检验对试验数据进行分析处理，所有的数据结果均以平均值(X(＿＿))±标准偏差(S.D.)表示，显著水平采用0.05。

2 结果

各饲料组草鱼的生长性能见表2。饲料中添加胆汁酸能显著提高草鱼的增重率（P<0.05），显著降低草鱼的饲料系数（P<0.05）。饲料中添加60 mg/kg胆汁酸组草鱼的增重率显著高于不添加胆汁酸的对照组（P<0.05），饲料系数显著低于不添加胆汁酸的对照组（P<0.05）。

表2 各饲料组草鱼的生长性能

胆汁酸添加量/（mg/kg）	初始体重/g	终末体重/g	增重率/%	T-检验	饲料系数	T-检验
0	11.56±1.21	48.90±7.73	321.50±22.27	P<0.05	1.66±0.56	P<0.05
60	11.28±1.07	52.60±6.84	365.20±17.39		1.53±0.03

注：同列肩标字母不同表示差异显著（P<0.05）。

各饲料组草鱼运输成活率和血清中皮质醇含量见表3。饲料中添加胆汁酸对草鱼的运输成活率没有影响。饲料中添加60 mg/kg胆汁酸组草鱼血清中皮质醇含量显著低于不添加胆汁酸的对照组（P<0.05）。

表3饲料中添加胆汁酸对成活率和血清皮质醇含量的影响

胆汁酸添加量/（mg/kg）	运输成活率/%	运输前皮质醇含量/（ng/ml）	运输后皮质醇含量/（ng/ml）	T-检验
0	100	5.59±0.32	54.26±3.56	P<0.05
60	100	5.43±0.45	20.34±1.45

注：同列肩标字母不同表示差异显著（P<0.05）。

3 讨论

       早期的研究结果表明，胆汁酸是一种脂肪代谢促进剂（Masatoshi, 1985），能够促进动物的生长（Vilder and Enzo, 2002）。胆汁酸的主要功能是帮助脂肪以及脂溶性物质消化吸收和利用。胆汁酸作为一种乳化剂，增加了同脂肪酶的接触面积（Bowen, 2001;  Mukhopadhyay and Maitra, 2004）。同时胆汁酸可以通过提高脂肪酶的活性来帮助脂肪消化。在本试验中，饲料中添加60 mg/kg胆汁酸能显著提高草鱼的增重率，显著降低草鱼的饲料系数，表明胆汁酸提高了草鱼的生产性能和饲料利用率。

       应激是指有害作用因子引起的动物一系列非特异性的生理防御反应的总和。在水产动物养殖中，水温变化(低温，高温)、运输、惊吓、水体污染、酸碱度变化．病原微生物侵袭、高密度饲养，分池、捕捉，饲料更换等活动都可能产生应激。当鱼类受到这些应激因子的刺激时，副肾皮质肥大，体内糖皮质激素和甾类皮质激素等水平上升，由此引起血淋巴细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞和溶菌酶的活性急剧下降，动物的免疫系统受到抑制，表现增重减慢，死亡率增加，从而严重影响了养殖的经济效益和生态效益。在本实验中，添加胆汁酸能显著降低草鱼血清中皮质醇的浓度，表明胆汁酸能提高草鱼的抗运输应激的能力。

4 结论

       综上所述，草鱼在运输等强应激刺激因子作用下，皮质醇激素含量迅速升高，从而引起对机体新陈代谢和生理机能的改变。运输应激的刺激可能导致草鱼肝脏等组织的损伤，造成机体不可逆转的生理变化，从而加速了鱼体的死亡，使得草鱼的运输困难。饲料中胆汁酸的添加可以有效提高草鱼的抗应激能力，降低应激对肝脏等组织的损伤。