饲料8大常规成分分析操作注意事项

畜牧编辑

　　笔者通过对饲料8大常规成分的检测过程进行实验操作、总结分析，对实验过程的准备、试剂配制、饲料分析整个操作过程中遇到的一些问题进行归纳，并指出引起实验误差的各种因素与注意事项，使饲料检验化验员能够及时掌握和正确运用这些标准，严格把好饲料原料和产品的质量关，为饲料工业生产和产品质量管理提供参考。

　　1 饲料中水分及挥发性物质的含量测定

　　水分在饲料质量控制中占有非常重要的地位，它影响饲料产品的质量，是重要的质量指标之一，同时又是一项重要的经济指标，与产品中其他各种技术指标的计算有着密切的联系，因此测定水分非常重要。常用的测定方法是依据GB/T6435-2006《饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定》。

　　1.1 饲料中水分测定实验操作中需要注意的问题

　　1.1.1 制样是非常重要的步骤，首先必须采用几何法和四分法进行缩分，然后使用植物粉碎机或咖啡磨，少用旋风磨。同时还要注意筛孔大小是否与检验要求相同，通常分样筛的孔径为0.42mm（40目）。因为粉碎粒度的大小直接影响分析结果的准确性。孔径过大不利于水分蒸发，孔径过小、样本过轻，不利于操作且使样本易于被氧化。另外，还要注意过筛时一定要将样品全部过筛并混合均匀。

　　1.1.2 称样皿应为玻璃或铝质，一般采用铝质较好，不宜破碎；称样皿的表面积能使样品铺开约0.3g/cm2（通常直径为40mm以上，高度在25mm以下），以利于水分蒸发，不宜过高或过细。

　　1.1.3 称样皿应预先在烘箱中烘30min，冷却至室温，称重准确1mg。注意冷却的时间应尽可能保持一致。

　　1.1.4 在称样时要特别注意防止水分的变化，对有些饲料例如维生素、咖啡等很容易吸水的物质，在称量时要迅速，否则越称越重。称量样品时，要戴细纱手套或脱脂薄纱手套，禁止直接用手操作。

　　1.1.5 烘箱温度 烘箱除定期请法定计量所进行校正外，平时操作时还要附加一支温度计，能及时标示箱体内的实测温度，箱体内每个位置也存在温度差异，应注意控制。通常建议平均每升干燥箱空间最多放一个称量瓶。

　　1.1.6 在烘箱中干燥时，称样皿应敞开盖子且与盖子一起干燥。

　　1.1.7 干燥时间 应针对不同饲料控制适当的烘干时间，不一定越长越好，因为时间太短，水分可能还没有完全逸出，太长可能物质又会发生化学反应。

　　1.1.8 干燥器中的干燥剂用硅胶为好。要注意干燥剂的颜色（含钴，干燥时呈蓝色）变化，当吸水过多（变棕或白色）时，应放在烘箱中烘干（烘干条件：135℃，2～3h），使之转变为脱水干燥色以后再用。

　　1.1.9 干燥器放置时间 冷却时间也要控制好，尤其需要恒重时，每次在干燥器放置时间不一，也很难达到恒重要求。

　　1.2 饲料中水分测定过程特殊样品的处理

　　1.2.1 当试样为湿润样时，可取适量样品置于预先已称重的大蒸发皿中，在80℃的条件下进行初步的烘干，然后在室内放置作为风干样，求出其减量。

　　1.2.2 如果饲料样品是含多汁的鲜样，如青贮、牧草等，无法直接粉碎，应进行预干燥处理。称取200～300g（准确至0.01g）鲜样，在105℃烘箱中烘干15min，立即把温度降至65℃，烘5～6h，取出在空气中冷却4h，称量，失重即为初水分，冷却后样品所含水为吸附水。经预先干燥处理的样品，应按下式计算原来试样中的水分含量：

　　原试样中总水分（%）=预干燥减重（%）+[100-预干燥减重（%）]×风干试样水分（%）。

　　1.2.3 某些含脂肪高的样品，烘干时间长反而会增重，乃脂肪氧化所致，应以增重前那次称重为准，且取最小值。

　　1.2.4 含糖分高的、易分解或易焦化试样，应使用减压干燥法（80℃，13KP，烘5h）测定水分。

　　1.2.5 含有挥发性物质（如样品中含有酒精、香精油、芳香酯等物质）；或成分易氧化变成棕色或可引起新的化学变化（如奶制品、植物性油脂、糖类物质）不宜采用此法，应采用减压蒸馏法比较合适。

　　1.2.6 含有果胶、明胶等的饲料，不能采用常压干燥的水分。

　　1.2.7 对于液体与半固体样品，要在称量皿中加入海砂，使样品疏松，扩大蒸发的接触面，并且用一个玻璃棒作为容器。先放到沸水浴中烘，烘的差不多，再放到烘箱烘，否则不加海砂样品容易使表面形成一层膜，造成水分不易出来。另外易沸腾的液体飞沫也先放到沸水浴中烘，以免重量损失。

　　1.2.8 样品水分含量高于17%，脂肪含量低于120g/kg，按下式计算：

　　1.2.9 经脱脂的高脂肪低水分试样及经脱脂和预干燥的高脂肪高水分试样，按下式计算：

　　2 饲料中粗蛋白质含量测定

　　粗蛋白质是饲料中含氮物质的总称，除蛋白质外，还包括非蛋白氮（NPN），如氨、游离氨基酸、肽、硝酸盐、胺盐、酰胺、生物碱、含氮糖苷、尿素等含氮化合物。

　　采用GB/T 6432-94《饲料中粗蛋白质的测定方法》，适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

　　2.1 饲料中粗蛋白质含量测定实验操作中需要注意的问题

　　2.1.1 样品需要粉碎并全部通过40目筛。

　　2.1.2 消化管中加浓硫酸时，应戴胶皮手套，且戴手套前应修剪指甲，以防止手套太紧或指甲太长划破手套，以至于在操作时烧伤皮肤。

　　2.1.3 消化时应经常转动凯氏烧瓶，加热应从低温开始分阶段升温，待样品焦化泡沫消失，再加强火力（360～400℃），直至溶液澄清后，再加热消化15min。消化中应防止管内液体过度沸腾喷溅，上冲粘到瓶颈上，使得部分样品消化不完全，造成系统误差过大。消化管内液体泡沫过多时可适当降温。各种样品的消化时间大致如下：预混料2h、配合饲料2h、菜籽粕2.5h、豆粕2.5h、鱼粉3h。

　　2.1.4 因消化需要回流过程，为减少蒸馏逸出损失，建议消化管或凯氏烧瓶加盖漏斗消化。

　　2.1.5 消化完成后，向容量瓶转移，不要立即定容，因为此时浓硫酸加水释放出大量热，立即定容会造成偶然误差偏大。

　　2.1.6 凯氏定氮蒸馏过程中，要求整套装置呈密闭状态，蒸馏前应检查定氮仪各导管间的连接处是否密闭，以免产生泄露。

　　2.1.7 使用蒸馏仪器时，严禁将蒸馏瓶两侧的阀门同时关闭，以免发生爆炸。当蒸汽气压过大时，可使导气管处于半关闭状态。

　　2.1.8 蒸馏时蒸馏装置的蒸汽发生器内的水应加甲基红数滴和硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，以防止水中氨态氮的逸失而影响测定值。

　　2.1.9 在蒸馏结束时，应用蒸汽将蒸馏装置反应腔中残液洗净并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液并入吸收液，以减少误差。

　　2.1.10 蒸馏完毕应先取下接收瓶，然后关闭电源，以免酸液倒流。

　　2.1.11 在测定饲料试样含量的同时，应用蔗糖做空白对照测定，以校正试剂不纯所发生的误差。

　　2.2 饲料中粗蛋白质含量测定过程特殊样品的处理及相关问题

　　2.2.1 对于液体或膏油状试样在取样时应注意取样的代表性，用干净并可放入消化管中的小玻璃容器称样。

　　2.2.2 如果试样中蛋白质含量高，可适当减少称样量，同时考虑蒸馏完全的问题，可适当延长蒸馏时间。

　　2.2.3 对于发霉变质的饲料，由于其硝酸盐含量偏高，可直接引起测定值偏低。

　　2.2.4 各种饲料的粗蛋白质中实际含氮量，差异很大，变异范围在14.7%～19.5%，平均为16%。凡饲料的粗蛋白质中氮含量尚未确定的，可用平均系数6.25乘以氮量换算成粗蛋白质量。凡饲料的粗蛋白质的含氮量已经确定的，可用它们的实际系数来换算。例如荞麦、玉米用系数6.00，大豆、蚕豆、燕麦、小麦、黑麦用系数5.70，牛奶用6.38。

　　2.2.5 为检查蒸馏过程是否有蒸汽逸失，可用硫酸铵代替试样测定氨含量，计算含氮量应为（21.29±0.2）%。

　　3 饲料中粗脂肪的测定

　　粗脂肪是饲料中可以溶于石油醚或乙醚的物质总称，除包括脂肪和类脂（磷脂、糖酯和固醇等）外，还包括可溶于石油醚的其他有机物质，如游离脂肪酸、磷脂、脂溶性纤维素、色素、脂溶性维生素和腊质等，故称为粗脂肪。

　　采用GB/T 6433-2006《饲料中粗脂肪的测定》，适用于油籽和油籽残渣以外的动物饲料。

　　3.1 粗脂肪测定实验操作中需要注意的问题

　　3.1.1 样品在105℃条件下烘干1h或用测定水分后的样品进行测定，用仪器法的称样量为1g，完全手工法的称样量为5g。

　　3.1.2 称取的样品需要粉碎并全部通过40目筛，试样粉末过粗，脂肪不易抽提干净；样品粉末过细，则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失，影响测定结果。

　　3.1.3 将称好的样品转移到定性滤纸上打包，并用脱脂棉线扎紧。打包时，要求包成窄的条块状，多余线头不要太长，且应塞入夹缝中为好，以便于在放入索氏提取器时，易操作、节省浸提腔的空间。

　　3.1.4 将索氏提取器各部位充分洗涤并用蒸馏水清洗后烘干。脂肪烧瓶在103±2°C的烘箱内干燥至恒重。所用抽提用有机溶剂都需要进行脱水处理，如含有水分则可能将样品中的糖以及无机物抽出，造成误差。

　　3.1.5 滤纸包放入提脂腔中时，不能超过虹吸管上端。石油醚在滤纸上挥发不留下油迹为浸提终点。

　　3.1.6 提取时温度不能过高，一般使石油醚刚开始沸腾即可，控制回流速度每小时至少循环10次或每秒至少5滴（10mL/min）。

　　3.1.7 将提取瓶放在烘箱内干燥时，瓶口向一侧倾斜45℃放置，使挥发物石油醚易与空气形成对流，这样干燥迅速。

　　3.1.8 样品及醚提出物在烘箱内烘干时间不要过长，因为一些很不饱和的脂肪酸，容易在加热过程中被氧化成不溶于石油醚的物质；中等不饱和脂肪酸，受热容易被氧化而增加重量。

　　3.1.9 石油醚有两种规格，应使用沸点40～60℃为好。

　　3.1.10 抽提室内严禁有明火存在或用明火加热，应用电热套或水浴进行加热。

　　3.2 粗脂肪测定中特殊样品的处理及相关问题

　　3.2.1 脂肪含量高于20%的试样，称取5～20g试样，与10g 无水硫酸钠混合，石油醚提取，蒸馏除去溶剂，干燥后将残渣粉碎成1mm大小的颗粒，再称取进行脂肪的测定。

　　3.2.2 样品含多量糖及糊精的，要先以冷水处理，等其干燥后联同滤纸一起放入提取器内。

　　3.2.3 如果是牛油粉那样的包被性，可准确称取2g试样置于研钵中，加入10～15g无水硫酸钠，认真研磨后全部移入滤纸，所用研钵、研磨棒均用被石油醚浸湿的脱脂棉认真擦拭，冲洗后连同脱脂棉一起放入筒形滤纸中。

　　4 饲料中粗纤维的测定

　　采用GB/T 6434-2006《饲料中粗纤维测定方法》，适用于粗纤维含量大于10g/kg的饲料；谷物和豆类植物。

　　4.1 饲料中粗纤维的测定实验操作中需要注意的问题

　　4.1.1 样品粉碎并能完全通过筛孔为1.0mm的筛。

　　4.1.2 在酸煮后和碱煮后冲洗至中性过程中，最好用热蒸馏水，易于过滤。

　　4.1.3 灰化皿可用瓷坩埚代替。

　　4.1.4 定量滤纸与定性滤纸的主要差异在于粗灰分的含量不同，定量滤纸粗灰分含量在0.01%（每张灰分0.000 103g），可忽略不计，而定性滤纸粗灰分含量为0.15%左右。

　　4.2 饲料中粗纤维的测定中特殊样品的处理及相关问题

　　含脂肪小于1%的样本可不脱脂；含脂肪1%～10%的样本不是必须的， 但建议脱脂；含脂肪在10%以上的则必须脱脂， 或用测脂后的试样残渣进行粗纤维的测定。

　　5 饲料中粗灰分的测定

　　采用GB/T 6438-2007《饲料中粗灰分的测定》，适用于动物饲料中粗灰分的测定。

　　5.1 粗灰分测定实验操作中需要注意的问题

　　5.1.1 用电炉碳化时应小心控制温度，以防碳化过快，试样飞溅。特别是含油或糖分高的饲料或液体饲料，可加一定量滤纸盖住，防止泡沫溢出。

　　5.1.2 为了避免样品氧化不足，不应把样品压得过紧，样品应松松地放在坩埚上。

　　5.1.3 灼烧温度不宜超过600°C，否则会引起磷、硫等盐的挥发。

　　5.1.4 灼烧后残渣颜色与试样中各元素含量有关，含铁高时为红棕色，含锰高时为淡蓝色，但当有明显黑色碳粒时，为碳化不完全，应延长灼烧时间。

　　5.1.5 灼烧后的灰分应呈灰白色无碳粒，若4h以上还未灰化完全，可取出，冷却后加几滴硝酸或过氧化氢，在电炉上干燥后再灰化。

　　5.2 粗灰分测定过程中特殊样品的处理及相关问题

　　5.2.1 如试样中盐类含量过高，应在碳化后用水溶解出盐类，将不溶物集于定量滤纸中，连同滤纸放入坩埚加热灰化。然后，将其与浸出盐类的滤液合在一起，加热蒸发，使之最后达到炽热状态。最后，静止冷却、称重，这一重量减去坩埚空重即为粗灰分的量。

　　5.2.2 为避免坩埚盖混淆，需在瓷坩埚上做标记，可用三氯化铁溶液处理，方法为：取0.5%三氯化铁溶液30mL，加数滴0.1mol/L硝酸银溶液（或钢笔水），混匀，用细笔蘸取此溶液在瓷坩埚上做标记，然后将其置于（550±20）℃高温电炉中灼烧后即可。

　　6 饲料中钙含量的测定需要注意的问题

　　动物体内矿物质元素约占4%，而Ca、P、Mg占矿物质元素的75%。可见，钙对动物来说是一种必需的元素。一般饲料中钙含量不超过1%，而鱼粉、骨粉类饲料中钙为5%～11%。

　　饲料中钙的测定方法有高锰酸钾间接测钙法（仲裁法）和乙二胺四乙酸二钠络合滴定法。对于钙含量低的样品可采用原子吸收分光光度法，该方法虽未被列为饲料分析的国标方法，但在食品加工业、林业分析中已为国家标准采用。该方法特别适用于大批样品的测定，准确度、精密度完全能满足饲料分析需求。

　　6.1 按照GB/T 6436-2002《饲料中钙的测定》仲裁法进行饲料中钙含量的测定，适用于单一饲料和配合饲料，检出限为150mg/kg。操作中应注意以下要点：

　　6.1.1 首先应根据试样的性质，采用合适的分解方法，有机物或干饲料采用干法，灰化要完全；而无机物或液体饲料应采用湿法，即：称取试样2～5g置于凯氏烧瓶中，准确至0.0002g，加入硝酸30mL，煮沸至NO2气体逸尽，冷却后加入70%～72%高氯酸10mL，小心煮沸至无色，不得蒸干（危险），冷却后加蒸馏水50mL，煮沸，驱逐NO2，冷却后移入100mL容量瓶中定容。

　　6.1.2 加入草酸铵时一定要慢，且不断搅拌，使形成的晶体较大，还要过夜使沉淀陈化。

　　6.1.3 洗涤草酸钙沉淀时，必须沿滤纸边缘向下洗，使沉淀集中于滤纸中心，以免损失。每次洗涤过滤时，都必须等上次洗涤液完全滤净后再加，每次洗涤不得超过漏斗体积的2/3。

　　6.1.4 在用高锰酸钾溶液滴定完成后，要进行空白滴定。

　　6.1.5 每种滤纸的空白值不同，消耗高锰酸钾溶液体积也不同。因此至少每盒滤纸应做一次空白溶液测定，滴定空白溶液时应包括滤纸在内。

　　6.1.6 高锰酸钾溶液浓度不稳定，最好在4℃冰箱内保存并应至少每月标定一次。

　　6.2 按照GB/T 6436-2002 EDTA络合滴定法进行饲料中钙含量的测定，操作中应注意以下要点：

　　6.2.1 在煮沸时要注意温度，避免液体溅出。

　　6.2.2 淀粉溶液要求现用现配。

　　6.2.3 由于三乙醇胺本身黏度较大，配成50%的溶液便于使用；乙二胺由于挥发性较强，也要配成50%的溶液使用。

　　6.2.4 必须用氢氧化钾溶液，不得使用氢氧化钠代替。

　　6.2.5 滴定过程中若溶液呈现紫红色，需要静置约半分钟，若不变回绿色，才能判定为终点。

　　6.2.6 指示剂的量要适当，否则影响终点的观察。

　　7 饲料中总磷含量的测定需要注意的问题

　　磷是动物所必需的矿物质元素之一，骨骼中仅有4.5%的磷。饲料中磷一般为0.1%～1.0%，只有肉粉中磷可超过5%。

　　磷的测定方法多采用分光光度法，但是显色方法不同，分为钒钼黄比色法和磷钼蓝比色法等。本文采用GB/T 6437-2002《饲料中总磷的测定 分光光度法》中钒钼黄比色法，该方法重现性好，适用于各种单一饲料和配合饲料中总磷的测定。在操作中要注意的事项包括以下几点。

　　7.1 试样分解（同6.1.1所述）。

　　7.2 钒钼酸铵显色试剂应避光保存，如生成沉淀则不能使用。

　　7.3 配制钒钼酸铵显色剂时，偏钒酸铵和钼酸铵皆不易溶。

　　7.4 钒钼酸铵显色剂用完需再配制时，标准曲线应重新绘制。

　　7.5 标准曲线通常选择5个浓度较合适，标准曲线的R2应大于0.999。

　　7.6 试样的吸光度值不得超出标准曲线的范围，待测溶液中磷含量最好控制在每毫升含磷0.5mg 以下。

　　7.7 待测溶液在加入显色剂后需要静置10min，再进行比色，但也不能静置过久。

　　8 饲料中水溶性氯化物的测定需要注意的问题

　　8.1 在标定硝酸银或滴定试样溶液时，速度应快，而且不能过分剧烈摇动，以防发生下列反应：

　　AgCl + SCN- = AgSCN + Cl-

　　这样会因氯化银沉淀转化成硫氰酸银沉淀，使消耗的硫氰酸铵溶液体积增加，而使结果偏低。

　　8.2 本法测定中是根据氯离子来计算氯化钠含量的，但由于添加到饲料中的氨基酸、维生素和抗生素等添加剂都可能带入氯离子，所以通过此法测定的氯化钠含量往往比实际添加的氯化钠的量高。

　　综上所述，影响分析结果的因素是非常多的，在实验过程中必须细心观察，认真操作，注意每一个细微的环节，才能获得符合要求的检测结果，才能真正对产品进行合理的评定。

　　此外，若要从大批原料或饲料中抽取部分样品来进行分析得出正确结果，完全如实地反映原物的组成成分，样品的正确采集和制备仍是重要步骤。正确采集并送至实验室中的平均样品较粗、不均匀，因此在分析前都需要进行粉碎、混匀、缩分、装瓶、贴标签等，这一系列操作过程称样品制备。本文在样品采集和实验室制备上并未深入探讨。希望读者能够在这些方面参考其他资料，做到正确采集和制样。
转自：饲料广角