胃蛋白酶消化率检测

于炳欣

一、原理

脱过脂的试样，用温热的胃蛋白酶溶液，在恒温、持续不断地搅拌下消化16h，过滤分离不溶性残渣，洗涤、干燥，测定残渣的粗蛋白含量。同时，测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白含量。

二、试剂

本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯

实验室用水应符合GB/T 6682中三级水的规格

2.1 0.2%胃蛋白酶溶液:将6.1 mL浓盐酸稀释至1 000 mL水中(溶液pHl-2)，加热至42-45℃ ,加入2g活性为1:10000生化级胃蛋白酶〔若活性不是1：10000，可使用活性1:3000生化级胃蛋白酶 (不可使用非生化级胃蛋白酶)，应注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶浓度应为每毫升20IU〕，并缓慢搅拌直至溶解 勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。临用前配制。

2.2 乙醚

2.3 丙酮

2.4 定氮试剂:按GB/T 6432中试剂及配制方法规定。5 仪器、设备

三、仪器设备

3.1 恒温式平转摇床:温控范围20-50℃，水浴式或空气浴式均可，转速可调(15-300 r/min).

3.2 实验室用样品粉碎机

3.3 索氏抽提器、脱脂设备:按GB/T 6433中仪器、设备规定。

3.4 定氮仪器、设备:按GB/T 6432中仪器、设备规定。

四、测定步骤

4.1 脱脂

称取1-2g试样用乙醚脱脂(含脂肪小于1%可不脱脂，含脂肪1%---10%建议脱脂，含脂肪大于10%则必须脱脂)。脱脂方法可参照GB/T 6433中粗脂肪抽提方法进行。脱脂后的样品需烘干。

4.2 胃蛋白酶消化

称取脱脂烘干后的样品若干克(精确至0.0002g)于250 ml带盖磨口瓶中，加150ml新配制的并已预热至42-45℃的胃蛋白酶溶液，要确保样品完全被胃蛋自酶溶液浸湿，盖紧瓶盖，将瓶夹于恒温摇床上，于45℃恒定搅动16h进行保温消化。

4.3 消化残渣的处理

从搅动器上取下磨口瓶，呈45。角放置，让残渣沉淀15min以上，随后在铺有快速滤纸的布氏漏斗上抽滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸上，再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。液体通过滤纸的速度应与倾入的速度相同。当上层液体通过滤纸后，于瓶中加人15 mL丙酮，用拇指盖住瓶口剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口，在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指让丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份15ml的丙酮进行洗涤，照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤器后，用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次，并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸，无损地移人凯氏烧瓶中，并将凯氏烧瓶置于105 ℃烘箱内烘干。

4.4 粗蛋白的测定

将上述烘干的残渣按GB/T 6432中方法测定粗蛋白含量(W2)。同时，称取脱脂烘干后的样品若干克(精确至0.0002g)，直接按GB/T 6432方法测定脱脂未酶解的样品中粗蛋自的含量(W1)。

五、结果计算

X(%)=(W1- W2)*100/ W1

式中:X-一试样的胃蛋白酶消化率，%

W1--脱脂未酶解的原样品中粗蛋白的平均含量，%

W2--脱脂酶解后残渣中粗蛋白的平均含量，%

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