发酵大豆蛋白中小肽的测定

于炳欣

1、原理：
利用三氯醋酸作蛋白质沉淀剂，将发酵大豆蛋白中的蛋白质和肽链较长的肽沉淀，并将其中的短链小肽用酸溶解出来，经过滤、离心、消化、蒸馏，测定其蛋白质含量，并以其占样品粗蛋白质的百分数来表示含量。本方法是参照中华人民共和国轻工行业标准大豆肽粉标准(QB/ T 2653 -2004)基础上修订而来。

2、试剂及仪器：
1）100ml烧杯；
2）10ml，50ml移液管；
3）干过滤装置；
4）半微量法或全量法粗蛋白质测定的试剂和装置；
5）15％三氯醋酸溶液；
6）4000 转/ 分钟的离心机。
3、方法：
准确称取样品6克于100 ml烧杯中,准确加入15 %三氯乙酸溶液50 毫升，混合均匀，静置5 分钟，以中速定性滤纸干过滤，弃去少许初始滤液，将滤液转移至离心管，在4000 转/ 分钟下离心10 分钟，准确移取其上清液10ml于消化管中，按半微量法（消化后定容至100ml，准确移取其中10ml进行蒸馏）或全量法粗蛋白质测定方法测定其粗蛋白质含量。同时做空白试验、测定样品的粗蛋白质的含量。
4、结果与计算：
小 肽%（半微量法）=（V1－V0）×C×6.25×0.014×10×5÷m×100%÷cp×100%
小 肽%（全量法）=（V1－V0）×C×6.25×0.014×5÷m×100%÷cp×100%
            式中：
V1--馏出液消耗盐酸标准液的体积，ml；
V0--空白试验消耗盐酸标准液的体积，ml；
C--盐酸的摩尔浓度，mol/l；
6．25×0．014--蛋白质转换系数；
m--称取样品质量，ｇ；
cp—样品的粗蛋白质含量，%。
重复性:   A）、每个试样的两个平行样间允许相对偏差为其算术平均值的10%，以其算术平均值上报结果；              
C）、所得的结果是指小肽占粗蛋白质的百分含量。
因其中含有无机氮，测得结果应减去无机氮，见非蛋白氮的测定。

移液管；
3）干过滤装置；
4）半微量粗蛋白质测定试剂和装置；
5）15％三氯醋酸溶液（TCA溶液）；
6）4000 转/ 分钟的离心机。
三、方法：准确称取样品3克于100 ml烧杯中,加入15 %TCA (三氯乙酸) 溶液25 毫升,混合均匀,静置5 分钟。将溶液定量转移,在4000 转/ 分钟下离心10 分钟后,取全部上清液，用干的滤纸过滤，准确移取其滤液10ml于消化管中，按测定粗蛋质方法消化、定容（100 ml）、移取1 0ml消化液蒸馏，测定其粗蛋白质含量（半微量定氮法）。同时做空白试验。
四、结果：
小肽%（占干基）=｛（V-V0）×C（HCl）×6．25×0．014×2．5（25ml÷10ml）×10（100 ml÷10ml）｝÷m×100%

式中： V---样品消耗HCl的体积，ml；
V0---空白消耗HCl的体积，ml；
C（HCl）---盐酸的摩尔浓度，mol/l；
6．25×0．014---蛋白质转换系数。
m---称取样品质量，ｇ。
小 肽%（占蛋白质）=小肽%（占干基）÷粗蛋白质%×100

重复性:   A）、每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果；  B）、允许绝对偏差为10%；
C）、以小肽占粗蛋白质的百分含量上报结果。


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