(1)稀释保护液的配制(标准配方): 第一液:10克乳糖加双重蒸馏水 80毫升、新鲜脱脂牛奶(用离心法取得)20毫升。取本溶液80毫升,再加卵黄20毫升、青霉素 10万单位、链霉素 100毫克。 第二液:取第一液45毫升,加葡萄糖3克、甘油5毫升。 所用的稀释溶液(卵黄除外)需过滤并经水浴煮沸消毒(甘油单独水浴消毒),冷却至30C再加卵黄和抗生素。
(2)稀释: 采用两次稀释法。先以第一液将精液稀释至最终稀释浓度的一半,裹以8层纱布,置于3~4C冰箱或广口保温冰瓶内预冷1~2小时,再用与第一液等量的第2液稀释。两次稀释均须在等温(稀释液与精液)下完成。稀释比例一般为2~3倍。
(3)冷冻: 先将液氮注入12磅广口保温瓶内,随后置冷冻器(由泡沫塑料及120目铜纱网制成),铜网面应低于保温瓶口2~3厘米,用低温温度计测试温度,随时调整铜网与液氮 面之间的距离,确保铜网面温度恒定于一80—一100C。用滴管吸取混匀后的精液,按每粒0.l毫升滴冻。精液宜分批冷冻,每批制作80~100枚颗粒为好。随即盖好保温瓶盖,停留4~5分钟,浸入液氮,用小勺收取颗粒。下一批冷冻前,需用纱布将铜网面擦拭于净,防止颗粒粘网,不好收取。 将制作好的颗粒精液浸入液氮中贮存备用。 饲料人才网
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