对纤维素酶测定问题求解！

zzy8604

按Steward(1997)方法测定，以纯棉花在瘤胃液中培养48小时(38 ℃ )的消失率代表瘤胃液中纤维素酶的相对活力。

在实验中，我用的是亨氏管保持的厌氧环境，遇到几个问题：一、试验中用的金属滤布是不是用的特殊的金属？加入重铬酸钾后在沸水浴，溶液的颜色发生了改变。金属滤布中的铁和重铬酸钾发生了反应，还有一股刺鼻的味道。二、用的金属滤布是不是要称重，保持单一的变量？三、配制的硫酸亚铁铵溶液是不是要进行标定？在网上查了下，有的是用重铬酸钾标定，那么用公式中的V1就可以算出来。按照国标是用的高锰酸钾来标定。

具体方法见下（也是参考其他人的）：

按Steward (1997)方法测定，称取5毫克脱脂棉于试管中，加入Menke培养液1毫升，再加瘤胃液2毫升，混合后在38℃恒温水浴振荡器中厌氧培养2天。取出后放在金属滤布上（200目）过滤，在依次用水、2mol/L氢氧化钠、水、2mol/L醋酸、水冲洗。吸干，连同滤布一起移入50毫升锥形瓶中。在锥形瓶中加入0.36mol/L重铬酸钾5毫升，沸水浴30分钟，冷却后加入15毫升蒸馏水，2滴邻苯氨基苯甲酸作指示剂，用0.2mol/L硫酸亚铁铵滴定到终点（由紫红色变成蓝色），记录所消耗的毫升数（V3）.用未被瘤胃液作用的5毫克棉花，按同样操作做空白对照。记录所消耗的毫升数（V2）.以纯棉花在瘤胃液中培养48小时（38℃）的消失率代表瘤胃液中纤维素酶的相对活力。

纤维素酶的相对活力%=（V3-V2）/( V1-V2)×100%

其中，V1为5毫升0.36mol/L重铬酸钾所需0.2mol/L硫酸亚铁铵的滴定毫升数。

谢谢大家！

401636839

用3.5 一二硝基水杨酸法测Cx 酶活力，纤维素酶水解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3.5 一二硝基水杨酸中的硝基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比法色法测定其还原物的生成量来表示酶的活力

zzy8604

那种方法我也知道  现在就要用这种方法测纤维素酶的活性  不需要分开来测   测总的就可以了   






问过一些老师  都没有回应，只有到论坛来问下，还是没人气啊    {:3_98:}