饲料粗蛋白测定

牧马祁连

饲料—粗蛋白含量的测定—凯氏法　　1 范围
　　本方法规定了饲料中粗蛋白含量的测定。
　　本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。
　　2 引用标准
　　GB601 化学试剂滴定分析用标准溶液的制备
　　3 原理
　　在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收液吸收后，再用盐酸标准溶液滴定。测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白的含量。
　　4 试剂
　　分析中，除另有说明外，仅使用化学纯的试剂和蒸馏水或与其纯度相当的水。
　　4.1 硫酸， ρ约1.84g/mL
　　4.2 混合催化剂
　　称取0.4g 硫酸铜(CuSO4·5H2O)， 6g 硫酸钾或硫酸钠，磨碎混匀。
　　4.3 氢氧化钠溶液，400g/L
　　4.4 硼酸溶液，20g/L
　　4.5 混合指示剂溶液
　　甲基红乙醇溶液(1g/L)，溴甲酚绿乙醇溶液(5g/L)，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
　　4.6 盐酸标准溶液，c(HCl)=0.1mol/L、0.02mol/L
　　4.6.1 配制c(HCl)=0.1mol/L
　　移取8.3mL 盐酸(分析纯)，于1000mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液为c(HCl)=0.1mol/L。
　　4.6.2配制c(HCl)=0.02mol/L
　　移取1.67mL 盐酸(分析纯)，于1000mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液为c(HCl)=0.02mol/L。
　　4.7 蔗糖，分析纯
　　4.8 硫酸铵，分析纯，干燥
　　4.9 硼酸吸收液
　　于1000mL 硼酸水溶液(10g/L)中加入10mL 溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L)，7mL 甲基红乙醇溶液(1g/L)， 0.5mL 氢氧化钠水溶液(40g/L)，混匀，置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。
        5 仪器设备
　　5.1 实验室用样品粉碎机或研钵
　　5.2 分样筛，孔径0.45mm(40 目)
　　5.3 分析天平，感量0.0001g
　　5.4 消煮炉或电炉
　　5.5 滴定管，酸式，10、25mL
　　5.6 凯氏烧瓶，250mL
　　5.7 凯氏蒸馏装置，常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式
　　5.8 锥形瓶，150、250mL
　　5.9 容量瓶，100mL
　　5.10 消煮管，250mL
　　5.11 定氮仪，以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪
　　6 试样制备
　　选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过0.45mm(40 目筛)，装于密封容器中， 防止试样成分的变化。
　　7 操作步骤
　　7.1 仲裁法
　　7.1.1 试样的消煮
　　称取试料0.5～1g(含氮量5～80mg)准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g 混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL 硫酸和2 粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360～410℃)直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
　　7.1.2 氨的蒸馏
　　7.1.2.1 常量蒸馏法
　　将试料消煮液冷却，加入60～100mL 蒸馏水，摇匀，冷却。将凯氏蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有25mL 硼酸吸收液(20g/L)和2 滴混合指示剂溶液的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶中加入50mL 氢氧化钠溶液(400g/L)，轻轻摇动凯氏烧瓶，使液溶混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内， 然后停止蒸馏。
7.1.2.2 半微量蒸馏法将试样消煮液冷却，加入20mL 蒸馏水，转入100mL 容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试料分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL 硼酸吸收液(20g/L)和2 滴混合指示剂溶液的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色， 否则需补加硫酸。准确移取10～20mL 试料分解液注入凯氏蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL 氢氧化钠溶液(400g/L)，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞
　　塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min，降下锥形瓶，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
　　注：7.1.2.1 和7.1.2.2 蒸馏法测定结果相近，可任选一种。
　　7.1.2.3 蒸馏步骤的检验
　　准确称取0.2g 硫酸铵，代替试料，按7.1.2 或7.2.2 步骤进行操作，测得硫酸铵的质量分数为21.19± 0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。
　　7.1.3 滴定
　　用7.1.2.1 或7.1.2.2 法蒸馏后的吸收液立即用盐酸标准溶液(0.1mol/L 或0.02mol/L)滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
　　7.2 推荐法
　　7.2.1 试样的消煮
　　称取0.5～1g 试料(含氮量5～80mg)准确至0.0002g，放入消化管中，加2 片消化片(仪器自备)或6.4g 混合催化剂，12mL 硫酸，于420℃下在消煮炉上消化1h。取出放凉后加入30mL 蒸馏水。
　　7.2.2 氨的蒸馏
　　采用全自动定氮仪时，按仪器本身常量程序进行测定。
　　采用半自动定氮仪时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25mL 硼酸溶液(20g/L)为吸收液，加入2 滴混合指示剂溶液，凯氏蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入50mL 氢氧化钠溶液(400g/L)进行蒸馏。蒸馏时间以吸收液体积达到100mL 时为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。
　　7.2.3 滴定
　　用标准盐酸溶液(0.1mol/L)滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
　　8 空白测定
　　称取0.5g 蔗糖，代替试料，按第7 章进行空白测定，消耗盐酸标准溶液(0.1mol/L)的体积不得超过0.02mL。消耗盐酸标准溶液(0.02mol/L)体积不得超过0.3mL。
　　9 结果计算
　　按下式计算粗蛋白质的质量分数：
　　粗蛋白质(%)=0.0140×6.25×100V(V2-V1)C/MV/
　　式中：V2——滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL;
　　V1——滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL;
　　C ——盐酸标准溶液浓度，mol/L;
　　m ——试样质量，g;
　　V ——试样分解液总体积，mL;
　　V′——试样分解液蒸馏用体积，mL;
　　0.0140——与1.00mL 盐酸标准液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的、以克表示的氮的质量。
　　6.25——氮换算成蛋白质的平均系数。
      10 精密度
　　每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。
　　当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为1%。
　　当粗蛋白质含量在10%～25%之间时，允许相对偏差为2%。
　　当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。
　　11 参考文献
　　GB/T 6432-94 饲料中粗蛋白测定方法

dazhui

这个方法有改进的地方，饲料厂要采用快速一些的方法。

肥肚鱼娘子

很全面，很基础