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发表于 2010-9-17 22:06:30
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Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
蛋白免疫印迹(Western blotting 或 Immunoblotting)一般由凝胶电泳、样品的印迹和
免疫学检测三个部分组成。第一步是做SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳,使待测样品中的蛋白质
按分子量大小在凝胶中分成带。第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持物
上,用得最多的材料是硝酸纤维素膜(NC 膜)和PVDF 膜,蛋白转移的方法多用电泳转移(转
移电泳),它又有半干法和湿法之分,现在大多用湿法。第三步是用特异性的抗体检测出已
经印迹在膜上的所要研究的相应抗原。免疫检测的方法可以是直接的和间接的。现在多用间
接免疫酶标的方法,在用特异性的第一抗体杂交结合后,再用酶标的第二抗体(碱性磷酸酶
(AP)或辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗第一抗体的抗体)杂交结合,再加酶的底物显
色或者通过膜上的颜色或X 光底片上暴光的条带来显示抗原的存在。该技术被广泛应用于
蛋白表达水平的检测中。 |
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