楼主: 游子吟

探讨一下霉菌毒素的检测方法?

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发表于 2009-9-13 22:45:27 | 显示全部楼层
10# xxc1963
用ELISA试剂盒可以的,液相色谱设备要求高。不过试剂盒一次最少买96样,测的完吗?
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发表于 2009-9-14 11:09:36 | 显示全部楼层
[quote]引用自xxc1963 发表于 2009-9-13 22:36的内容
能不能具体检测毒素的种类
  色谱只要有标准品肯定没问题,试剂盒和试纸大多是AB1。
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 楼主| 发表于 2009-9-14 17:40:05 | 显示全部楼层
饲料中霉菌毒素的检测方法主要有目测法、薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法、放射免疫法、气相色谱法及快速试纸检测法。常用的方法为薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法、快速试纸检测法。每种方法都有其利弊和适用的条件。具体使用那种方法主要看你对毒素含量的精度要求和你的实验室条件而定了。
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 楼主| 发表于 2009-9-14 17:43:23 | 显示全部楼层
TLC法是测定霉菌毒素的经典方法, 是我国测定食品及饲料中霉菌毒素 的标准方法之一。
如黄曲霉毒素的检测原理:是将样品经过提取、 柱层析、洗脱、 浓缩、 薄层分离后, 在波长 365 nm紫外光下产生蓝紫色或黄绿色荧光, 黄曲霉毒素 B1、 B2 产生蓝紫色荧光, 黄曲霉毒素 G1、 G2 产生黄绿色荧光, 并根据其在薄层上显示的最低检出量来确定其含量, 是一种半定量检测技术。
优点:TLC有单向展开法和双向展开法,其中双向展开法能进一步除去样品中的杂质, 提高灵敏度。TLC法由于设备简单,易于普及,所以国内外仍在使用。
缺点:由于该法样品前处理繁琐,且提取和净化效果不够理想, 提取液中杂质较多, 因而在展开时影响斑点的荧光强度, 双向展开法虽避免了杂质干扰,但增加了操作步骤和时间。TLC法较适合于对黄曲霉毒素的定性检测, 是研究黄曲霉毒素初期所使用的主要方法。薄层色谱法对样品处理繁琐, 实验过程复杂, 所需时间多, 易受杂质干扰, 准确性差, 对实验人员危害大。
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 楼主| 发表于 2009-9-14 17:44:34 | 显示全部楼层
酶联免疫吸附法的定义:是抗原(或抗体)吸附剂和用酶标记的抗体(或抗原)与标本中的待测物(抗原和抗体)起特异的免疫学反应, 用测定酶活力的方法来增加测定的敏感度,是一种定性或半定量的方法。
优点:酶联免疫吸附法特异性强、 灵敏度高、 成本低, 适于批量检测, 食品和饲料工业上可利用此方法来界定食品或饲料中黄曲霉毒素的超标问题。关于运用酶联免疫法检测AFTB1的检测报道也较多,目前国外已有较成熟的检测食品及饲料中 AFTB1 等真菌毒素的 ELISA 试剂盒出售。
缺点:由于酶本身的不稳定性, 用此方法检验黄曲霉毒素有可能带来假阳、 阴性结果, 复杂样品受干扰, 检测准确度不高。 所以研制出的黄曲霉毒素快速测试盒多以测定最具毒性的种属为主, 酶联免疫吸附法的检测精度还有待于提高。
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 楼主| 发表于 2009-9-14 17:45:20 | 显示全部楼层
HPLC是近几年发展起来的检测 AFTB1 方法,主要是用荧光检测器检测,在适宜的流动相条件下,采用反相 C18 柱,使多种黄曲霉毒素同时分离。文镜采用国产硅镁吸附柱层析分离纯化玉米中 AFTB1, 用HPLC 法检测, 方法简便,纯化效果好, 最低检出量为0.08 ng,回收率为 92.87%,该法制柱方便,而且降低了成本。
优点:李佐卿等则将免疫学技术和 HPLC法相结合采用免疫亲和柱对样品进行净化,AFTB1 回收率达到97.3%,相关系数 r=0.999 4,最低检出限为 6.25 pg,该法将提取、净化、浓缩一次完成,大大简化了前处理过程提高了工作效率及方法的灵敏度,但增加了成本。高效液相色谱法灵敏、 分辨率高, 可作定性、 定量分析, 同时可检测多个黄曲霉毒素种类, 适于大批量样品的分析。
缺点:高效液相色谱法仪器设备昂贵, 技术水平要求高, 每次实验所使用的化学药剂和处理途径对试验结果影响程度差别很大, 对实验结果的精度造成影响样品还需进行繁琐的纯化处理, 不适合快速检测。
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 楼主| 发表于 2009-9-14 17:53:47 | 显示全部楼层
快速检测试纸的检测采用胶体金免疫层析技术,应用免疫层析技术检测霉菌毒素的含量,属于定性和半定量方法。优点是操作简单,不需要昂贵的仪器设备,结果准确,成本低,可以逐份检测,30分钟内可以出结果,非常方便实用。适合饲料厂采购购买原料时快速检测所需,也可以作为养殖场饲喂动物时检测霉菌毒素的一个简单的判断指标。
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发表于 2009-9-14 20:33:02 | 显示全部楼层
学习、学习。本企业正需要啦。
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发表于 2009-9-15 23:27:32 | 显示全部楼层
17# 游子吟
有没有试纸条的经销电话和价格,如果有使用效果可不可以给说说?
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 楼主| 发表于 2009-9-16 09:11:14 | 显示全部楼层
上海澳灵生物科技有限公司的霉菌毒素快速检测试纸,你可以试试。我只是用过黄曲霉毒素的测试纸,效果还可以。其他的霉菌毒素检测试纸,没用过,不好说怎么样?具体情况你可以上网查查看,打电话咨询一下。
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