畜禽组织中三聚氰胺的测定

天高云淡哥哥 · 发表于 2009-4-10 11:08:12

畜禽组织中三聚氰胺的测定

Determination of melamine in livestock and poultry tissues

2008-12-26发布 2009-01-01实施

四川省质量技术监督局 发布

前言

1 范围

2 规范性引用文件

3 方法1：高效液相色谱法

4 方法2：气相色谱质谱法

附录A （资料性附录）三聚氰胺标准图谱

前言

本标准的附录A为资料性附录。

本标准按GB/T.1.1-2000《标准的结构和编写规则》和GB/T.1.2-2002《标准中规范性技术要素内容的确定方法》要求进行编制。

本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准由四川省畜产品安全检测中心负责起草。

本标准起草人：林顺全、张静、李云、高庆军、廖峰、赵立军。

畜禽组织中三聚氰胺的测定

1　范围

本标准规定了测定畜禽组织中三聚氰胺的含量的高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱质谱联用法(GC-MS)，其中GC-MS法为确证法。

本标准适用于畜禽肌肉及内脏中三聚氰胺的测定。

本标准中HPLC法最低定量限为2.0mg/kg，GC-MS法最低定量限为0.05mg/kg。

2　规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

3　方法1：高效液相色谱法

3.1　原理

试样经乙醚脱脂后用三氯乙酸溶液提取，提取液离心后经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，洗脱物吹干后用甲醇溶液溶解，用高效液相色谱仪进行测定。

3.2　试剂与材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682的三级水，色谱用水符合GB/T6682一级水的规定。

3.2.1　甲醇：色谱纯。

3.2.2　乙腈：色谱纯。

3.2.3　氨水：浓度25%～28%。

3.2.4　混合型阳离子交换固相萃取柱：60mg，3mL。

3.2.5　三氯乙酸溶液10g/L：称取10g三氯乙酸加水至1000mL。

3.2.6　氨水甲醇溶液：量取5mL氨水，用甲醇定容至100mL。

3.2.7　乙酸铅溶液：取2.2g乙酸铅用约30mL水溶解后定容至100mL。

3.2.8　滤膜：0.45µm，有机相。

3.2.9　甲醇溶液：200mL甲醇(3.2.1)加入800mL一级水，混匀。

3.2.10　流动相：称取2.16g辛烷磺酸钠和2.10g柠檬酸于1L容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。取该溶液900mL加入100mL乙腈(3.2.2)。

3.2.11　三聚氰胺标准品(纯度>99%)。

3.2.12　三聚氰胺标准溶液

3.2.12.1　标准储备液：称取100mg(精确到0.1mg)的三聚氰胺标准品，用甲醇溶液(3.2.9)溶解并定容于100mL容量瓶中，该溶液浓度为1mg/mL，于4℃冰箱内贮存，有效期3个月。

3.2.12.2　标准中间液：吸取标准储备液5.00mL，于50mL容量瓶内，用甲醇溶液(3.2.9)定容至50mL，该溶液三聚氰胺浓度为100μg/mL，于4℃冰箱内贮存，有效期1个月。

3.2.12.3　标准工作液：用移液管分别移取标准中间液2mL、5mL、10mL、15mL、20mL于5个100mL容量瓶内，用甲醇溶液(3.2.9)定容，该溶液三聚氰胺浓度为2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL。于4℃冰箱内贮存，有效期1周。

3.3　仪器与设备

3.3.1　高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器或紫外检测器。

3.3.2　离心机：10000r/min。

3.3.3　涡旋混合器。

3.3.4　带盖塑料离心管：50mL

3.3.5　氮吹仪，可控温至60℃。

3.3.6　固相萃取装置。

3.3.7　实验室用绞碎机。

3.3.8　震荡摇床。

3.4　试样制备

猪肉、猪肝：取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，绞碎并使均匀。

试样放入聚乙烯瓶中-16℃～-20℃条件下保存。

3.5　测定步骤

3.5.1　提取

称取2g试样(精确至0.01g)于带盖塑料离心管（3.3.4），加入约25mL乙醚，摇床上振荡20min，弃去乙醚，准确加入18mL三氯乙酸溶液(3.2.5)和2mL乙酸铅溶液(3.2.7)，摇匀，涡旋提取2min，在10000r/min离心机上离心5min，上清液备用。

3.5.2　净化

分别用3mL甲醇，3mL水活化混合型阳离子交换固相萃取柱，准确移取10mL上清液分次上柱，控制过柱速度在1mL/min以内。再用3mL水和3mL甲醇洗涤混合型阳离子交换固相萃取柱，抽近干后用氨水甲醇溶液(3.2.6)6mL洗脱。洗脱液50℃氮气吹于，准确加入甲醇溶液(3.2.9)1.0mL，涡旋振荡30s，过0.45µm滤膜，上机测定。

3.5.3　液相色谱条件

色谱柱：C18柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒度5μm；或性能相当的色谱柱。

柱温：30℃。

流动相流速：1.0mL/min。

检测波长：240nm。

3.5.4　测定

按照保留时间进行定性，试样与标准品保留时间的相对偏差不大于2%，单点或多点校正外标法定量。待测样液中三聚氰胺的响应值应在工作曲线范围内。

3.6　结果计算和表述

3.6.1　试样中三聚氰胺的含量X，以质量分数毫克每千克(mg/kg)表示，单点校正按式(1)计算