应用自家组织苗的风险评价和制苗方法的创新（转）

登高远眺

      蓝耳病和圆环病毒, 是当前养猪场普遍存在, 并且最难以对付的两种疾病. 由于当前国内市场上还没有针对这两种疾病的免疫效果确切的疫苗供应, 因此, 自家组织苗作为预防这两种疾病的一种无奈选择, 正在全国各地大小猪场被广泛使用.
      2002年, 自家组织苗最初开始在猪场推广使用时, 的确取得了显著的效果, 对猪场有效地预防蓝耳病和圆环病毒, 发挥了巨大的作用, 很多濒临倒闭的猪场因此而起死回生. 但问题是: 很多人过分地夸大了自家组织苗的作用, 有的猪场场长和技术人员, 对自家组织苗甚至到了迷信的程度. 曾经有一个猪场场长介绍他的养猪经验, 说他平时其他工作基本都不用管, 只要监督制作好自家组织苗就可以了, 以致他们猪场的病猪根本看不到肺脏病毒性病变, 仍然坚持采集病猪的肺脏制作自家组织苗.
      目前, 很多养猪技术人员对自家组织苗的认识, 最起码存在下列两大误区:
      (1)自家组织苗可以长期使用. 自家组织苗的效果, 取决于病变组织中病毒的含量. 2002年, 当自家组织苗刚开始推广使用时, 由于之前猪场一直没有使用过有效的疫苗, 发病猪症状都比较典型, 病变组织中病毒含量较多, 而且每批采集的病料中病毒含量的变异度也不大, 所以, 自家组织苗的效果显著而且稳定. 但是, 随着疾病逐渐得到控制, 典型的病料越来越难以获得, 通过采集自然发病猪的病变组织制作自家组织苗, 效果将越来越差, 这是使用自家组织苗的必然规律. 事实已经证明: 很多猪场在使用自家组织苗一段时间后, 效果确实越来越差, 不但蓝耳病或圆环病毒依然存在, 而且其他疾病也越来越难以控制. 所以, 自家组织苗只能是临时应急的一种措施, 不能长期使用. 长期使用自家组织苗, 将给猪场带来一系列风险, 具体我们将在本文风险评价部分讨论.
      (2)自家组织苗包医百病. 很多技术人员都认为: 只要是猪场存在的疾病, 自家组织苗中都会含有相应的抗原, 所以, 使用本场发病猪病变组织制作的自家组织苗, 可以预防猪场存在的所有疾病. 这种认识是非常错误的. 作为一种疫苗, 要使其对特定的传染性疾病产生免疫作用, 必须具备两个条件: 1)疫苗中必须含有相应的具有免疫源性的抗原; (2)抗原的剂量必须符合一定的要求. 抗原量太少, 无法有效产生抗体; 此外, 抗原量太多或太少, 还有可能诱导免疫耐受. 自家组织苗通常都是通过采集病猪的病料来制作的, 然而, 各种病原对组织的嗜好是不一样的, 蓝耳病毒在肺部含量较多, 而猪瘟病毒因其嗜内皮细胞的特性, 使其在肾脏和免疫器官含量较多. 如果把病猪所有内脏一起捣碎制苗, 各种抗原都将被稀释, 很难达到有效免疫的抗原量. 所以, 我们制作自家组织苗, 都是有针对性的, 疫苗用于预防什么疾病, 就应该选择什么病原含量最多的器官或组织制苗.
      因此, 自家组织苗不是包医百病的灵丹妙药, 不但不能长期使用, 也不能滥用. 在应用自家组织苗以前, 一定要认真进行风险评价, 在权衡利弊的基础上, 再进行科学决策.
      1 风险评价 应用自家组织苗的风险, 主要来自下列两个方面:
      1.1 免疫效果不确切的风险. 由于我们无法准确地定量分析病料组织中抗原的含量, 同时, 自然发病的猪, 每头的病变组织中病原的含量都存在很大的变异. 所以, 用自然发病猪病变组织制作的自家组织苗, 其免疫效果存在很大的不确定性. 我们一方面无法判断这种疫苗能否产生有效保护, 另一方面, 可能这批疫苗能产生有效保护, 但下批却无法产生有效保护.
      1.2 疫苗灭活不彻底的风险. 自然发病的猪, 体质和抵抗力下降后, 很容易继发或并发其他疾病, 所以, 自然发病猪的病变组织中, 大都含有多种病原. 这些病原对灭活条件的要求, 存在很大的差异. 以甲醛溶液为例, 需氧细菌灭活需要的浓度为0.1-0.2%, 厌氧细菌灭活需要的浓度为0.4-0.5%, 病毒灭活需要的浓度为0.05-0.4%, 而且, 猪瘟病毒用甲醛溶液灭活效果不理想. 所以, 制作不同的疫苗, 对灭活剂的种类和灭活剂的浓度要求是不一样的. 种类选择不合理, 无法达到灭活的效果. 浓度太低, 灭活不彻底; 浓度太高, 破坏抗原的免疫源性, 使免疫效果变差. 现在很多猪场制作自家组织苗, 都是使用0.3-0.4%的甲醛溶液(有的猪场甚至使用0.3-0.4%福尔马林, 甲醛含量仅相当于0.1-0.15%), 这种灭活方法, 无法保证疫苗中所有的病原都被灭活. 尤其是使用病料组织制苗这种方法, 病料组织无法彻底过滤, 疫苗中含有大量组织破碎后形成的有机物质, 灭活不彻底的问题就更普遍.
      疫苗灭活不彻底, 将给猪场带来如下两方面的风险:
      1.2.1 造成疾病在猪场中传播. 疫苗中未灭活的细菌或病毒达到一定数量, 就可能造成这些疾病在猪场流行, 而且这种流行属于人工感染后的流行, 病源的致病力比自然感染时更强, 也更难以控制. 在目前应用自家组织苗的猪场中, 已知最起码有一种疾病是由于使用灭活不彻底的自家组织苗而传播的. 猪副嗜血杆菌作为一种兼性厌氧菌, 对使用福尔马林灭活的浓度要求很高, 虽然目前仍无法获得在使用病料组织制作自家苗(疫苗中含有较多组织物质, 灭活浓度肯定要比细菌分离培养制苗时浓度要高)情况下, 使猪副嗜血杆菌灭活所需甲醛含浓度的准确数据, 但我场曾经做过自家组织苗的攻毒试验, 使用经过0.4%甲醛溶液灭活的自家组织苗和未经甲醛灭活, 但经过杀菌处理(每1000ml加入阿莫西林500mg+氟苯尼考250mg)过的自家组织苗, 分别对健康猪作大剂量攻毒试验(每头猪分左右颈部肌肉注射20ml), 都曾经成功地诱导出典型的猪副嗜血杆菌症状.
       1.2.2 免疫耐受的风险. 低剂量的病毒感染, 是免疫耐受的重要诱因. 前面我们已经分析过, 猪瘟病毒使用甲醛溶液灭活, 无法实现彻底灭活的目的. 如果用于制作自家组织苗的病料中含有少量猪瘟病毒, 这些病毒含量低至不足以引起猪瘟流行, 但却可能诱导猪群产生猪瘟免疫耐受, 使猪瘟在猪场呈非典型和散发流行. 目前, 很多猪场猪瘟免疫效果都比较差, 是疫苗质量问题? 免疫操作问题? 还是由于使用灭活不彻底的自家组织苗所带来的猪瘟免疫耐受问题? 值得我们进一步探讨.
       2 科学决策
正因为自家组织苗存在上述系列的风险, 所以, 对于猪场是否应该使用自家组织苗, 应持非常慎重的态度, 并坚持以下三条原则:
       2.1 细菌性疾病不要使用自家组织苗.通过细菌分离培养的办法制作自价苗, 不但成本低, 而且可以克服自家组织苗的所有缺点, 所以, 对于细菌性疾病, 完全没有必要采用采集病猪病变组织制作自家苗这种方法.
       2.2 对于病毒性疾病, 如果市场有正规的, 且免疫效果确切的疫苗供应, 就不应该选择使用自家组织苗. 猪瘟, 伪狂犬等烈性病毒性疾病, 当前国内市场上都有免疫效果确切的疫苗供应, 只要猪场从正规渠道选购, 并规范免疫操作, 一般都不会出现这些方面的问题. 目前国内市场上尚没有正规的疫苗供应, 或者虽然已有正规的疫苗供应, 但免疫效果尚存在争议的病毒性疾病, 仅限于蓝耳病和圆环病毒, 而且这两种疾病又是猪场最难以对付的疾病, 所以, 自家组织苗的使用, 大都仅限于针对这两种疾病的预防.
       2.3 只有确证蓝耳病或圆环病毒在猪场致病的情况下, 才可考虑使用自家组织苗. 蓝耳病和圆环病毒虽然在猪场广泛存在, 但并不是在所有猪场都致病, 很多猪场其实仅仅是猪群健康带毒. 那些自称蓝耳病或圆环病毒正在流行的猪场, 可能并不真正是蓝耳病或圆环病毒. 可以肯定的是, 曾经很多人都认为是蓝耳病的一些症状(如毛毛猪, 耳朵发绀等), 其实是由猪副嗜血杆菌所引起的.
       判断猪场是否需要制作自家组织苗的依据, 不是猪场是否存在蓝耳病或圆环病毒病原, 而是这些病原是否在猪场致病. 确证蓝耳病或圆环病毒在猪场是否致病, 最直接和最有效的办法, 就是兽医学上常用的人工攻毒方法. 按本文第3节所述的攻毒步骤, 对健康猪进行攻毒试验, 并认真观察攻毒猪的症状, 如果经过7-10天后, 攻毒猪出现蓝耳病或圆环病毒症状, 说明这些病原在猪场确实致病, 需要制作自家组织苗. 否则, 说明通过严格的饲养管理, 猪场完全可以控制这两种疾病, 不需要制作自家苗.
      3 制苗作方法潜在的改良途径
理论上, 现行自家组织苗存在的这些缺点, 是可以利用兽医学的方法进行改进的. 改进的方法, 就是人工攻毒提纯病料, 具体步骤如下:.
      3.1 攻毒猪的选取: 选择健康, 且经过2次以上猪瘟, 口蹄疫, 伪狂犬, 流感等重要烈性传染病免疫的小猪或中猪2-3头, 严格隔离饲养, 栏舍每天消毒, 饲料中添加药物预防细菌性疾病.
      3.2 攻毒病料的选择和制备: 选择蓝耳病或圆环病毒症状典型的病猪一头, 摘取病猪的肺, 脾和淋巴结, 除去结缔组织和病变不典型部分, 按照制作自家组织苗的步骤, 并按每300g病料制苗1000ml的比例, 对病料进行捣碎, 过滤和稀释(有必要说明的是, 很多猪场在制作自家组织苗时, 都忽视了一个细节: 捣碎机高速运转, 温度上升很快, 夏天温度高时, 容器中的病料很容易超过40oC, 使蛋白质发生变性, 破坏病原的免疫源性. 故夏天制苗时, 病料, 加入捣碎机中的生理盐水和用于水浴冷却病料的冷水, 都应预先在冰箱中经冷冻过), 稀释后的病料悬浮液不经甲醛灭活, 而是每1000ml加入氟苯尼考250mg+阿奇霉素250mg (应该注意的是: 阿奇霉素禁止在兽医临床上应用), 充分搅拌均匀, 放入37oC恒温箱中杀菌24小时, 再放入冰箱中冷藏备用.
       3.3 攻毒: 攻毒猪隔离饲养7天后, 观察无异常, 即可进行攻毒. 取3.2制备的攻毒病料, 每头待攻毒猪分左右两侧颈肌注射攻毒病料各10ml(即每头猪20ml).
      3.4 攻毒病料的提取: 已攻毒猪再经隔离饲养7-10天后, 开始出现症状, 此时即可解剖病猪提取病料. 正常情况下, 从攻毒猪提取的病料, 比自然感染猪的病变更典型. 特别是在从攻毒猪提取病料进行再攻毒后, 第2代和以后各代提取的病料, 病变将更加典型, 基本上都是理想的制作自家苗材料, 而且每头猪的病料基本都保持一致.
       通过人工攻毒方法产生的病料, 由于攻毒剂量比自然感染时大, 每头猪的攻毒剂量又基本相当, 故病猪发病典型, 抗原量较多, 而且每头猪病料中抗原含量变异度小, 其免疫效价和稳定性必然大大超过自然发病猪的病料. 同时, 攻毒猪都经过其他疾病的严格免疫, 所提取的病料比自然发病猪更纯净, 避免了污染其他病原而造成疾病扩散和免疫耐受的风险. 虽然要以健康猪作代价, 但一头猪的病料可制作1000ml以上的自家苗, 保护300头以上小猪, 经济上还是比较合算的.
       理论上, 由于攻毒病料是从本场的病猪提取, 并没有外来的传染源, 只要对攻毒猪严格隔离饲养和消毒, 一般不存在病原扩散的问题.
当然, 这种自家组织苗的制作方法, 在生产实践中是否会造成病原扩散, 仍有待有关专家进一步论证和检验. 生产场要推广应用这种方法, 必须严格执行国家有关兽医防疫的法律和法规, 得到有关兽医防疫和和食品安全部门的许可。

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作者简介: 冷和平 1965年---, 江西高安人. MBA硕士, 华南农业大学兽医专业博士(在读). 1988年华南农业大学畜牧系毕业后, 一直在猪场从事技术和管理工作, 主攻猪场饲养管理和兽医技术.