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发表于 2008-6-13 16:38:45
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猪繁殖与呼吸系统综合征实验室检测技术
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猪繁殖与呼吸系统综合征实验室检测技术
猪繁殖与呼吸系统综合征（PRRS）又称蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸系统综合征病毒（PRRSV）引起的目前危害养猪业的主要疾病之一，主要表现为母猪繁殖障碍及不同日龄猪的呼吸道症状。蓝耳病病毒在猪群中持续感染，可破坏各个日龄猪免疫系统功能，使猪群对其他病原体易感，严重影响其他疫苗的免疫效果，极大的降低的猪群的生产性能。
近年来，该病在我国出现新的流行特点，病毒发生变异，致病力增强，在部分地区出现大规模爆发流行。临床以高热、皮肤发绀、眼结膜炎、呼吸系统症状、神经症状及死亡为主，表现为发病快、症状严重、病变明显，死亡率高，给我国养猪业带来了巨大的经济损失。
因此，对蓝耳病进行及时确诊、监测猪群流行动态、评估猪群感染压力，从而为确定猪群免疫疫苗类型及免疫时机，及时有效的控制和预防该病显得尤为重要。而在实际工作中，根据需要科学的选择检测方法，根据检测目的严谨的选择检测试剂盒是实验室检测工作准确的服务于临床免疫决策、生物安全风险评估、流行动态监测等目的的基本保证。如果试验方法选择不当可能使结论谬以千里，如果试剂盒选择不当无异于得到盲目的结论。
猪蓝耳病诊断检测试剂品种繁多，依据其主要用途，可以分为两大类；一类是基于分子生物学的RT－PCR诊断试剂，主要用于发病快速诊断和猪群带毒状况和种类的检测；另一类为基于免疫学的ELISA检测试剂，主要用于猪场蓝耳病感染压力评估、疫苗免疫种类的确定和免疫时机确定以及免疫效果评估等。下面将分别加以介绍。
一、病原学检测
蓝耳病在我国各省市普遍流行，临床症状与猪瘟、伪狂犬、猪细小病毒病、猪乙型脑炎、猪弓形体病等症状相似，仅从临床症状及大体剖检病变很难进行确诊，必须依赖实验室检测。用于病原学检测的方法主要有病毒分离鉴定、核酸探针技术、RT－PCR检测和免疫组化方法。目前RT-PCR已有商品化试剂盒可供操作，在大型养殖企业的实验室中正逐步发挥敏感、特异及时确诊的作用，在该病突发时，能够做到快速诊断及时采取措施，从而最大限度的降低损失。
随着病毒核酸提取技术的不断改进，RT－PCR试剂盒操作的快捷性能也在不断提升，目前商品化试剂盒已经由异硫氰酸胍法提取病毒RNA、TRIzol方法提取病毒RNA逐步转变为利用心柱内硅基质膜提取，省去了繁杂的步骤和对离心机等设备的较高要求，越来越为基层实验室提供了应用的便利。另外，对于进行大量监测和深入研究工作的实验室，为了提高工作效率、最大程度的降低污染的可能性、对病毒核酸含量进行量化，实时荧光RT－PCR试剂盒是首要的选择。北京世纪元亨动物防疫技术有限公司，正是基于以上原因，积极研制开发了猪繁殖与呼吸综合征病毒（通用型、变异型）柱式提取改良的普通RT－PCR试剂盒和猪繁殖与呼吸综合征病毒（通用型、变异型）柱式提取荧光RT－PCR试剂盒。使用者应结合自己的实际工作需要和实验室基础设施配备情况进行选择使用普通RT－PCR方法或实时荧光RT-PCR方法；根据以下介绍选择选择不用类型的检测试剂盒：
1、猪繁殖与呼吸综合征病毒RT－PCR诊断试剂盒（通用型）
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）反转录聚合酶链反应（RT－PCR），用于检测猪血清、精液和组织中的PRRSV，适用于PRRSV的检测、诊断和流行病学调查。
2、猪繁殖与呼吸综合征病毒RT－PCR诊断试剂盒（变异株）
本试剂采用RT-PCR方法检测猪肺、脑等脏器组织和血清中的PRRSV（Nsp2 1594－1680变异株）的RNA，适用于PRRSV（Nsp2 1594－1680变异株）的诊断、检测和流行病学调查。
二、血清学检测
对于规模化养殖场来说，猪群的日常抗体水平监测是选择疫苗、评估免疫程序合理性、掌握猪群健康状态的重要手段，同时也可从侧面反映猪场管理是否合理，因此是养殖企业疫病监测工作的重点。目前用于PRRSV抗体检测的方法有免疫荧光实验（IFA）、免疫过氧化物酶单层分析法（IPMA）、中和实验（SVN）和酶联免疫吸附试验（ELISA）。与其他方法相比，ELISA检测操作简便，易于标准化，快速敏感，非常适合进行大规模流行病调查和疫病监测。
国内外学者在PRRSV抗体ELISA试剂盒的研发上做了大量研究，基于不同的PRRSV蛋白建立了不同的ELSIA试剂。
1、以核衣壳蛋白（N蛋白）作为主要包被抗原的PRRSV抗体间接ELISA检测试剂盒
http://bbs.shejis.com/viewthread.php?tid=1561373&fromuid=318622 |
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发表于 2008-6-4 13:35:14
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