现代生物工程制剂：猪生长素释放因子基因质粒

iamtao216

四川农业大学、东北农业大学、中国农科院畜牧所都曾做过大量关于猪生长激素释放因子（pGRF）基因质粒的研究，本品在广东、福建规模猪场试用效果显著，断奶至出栏阶段增重可以提高7%-10%，料肉比降低0.2-0.3，明显提高猪抗病能力，是生物技术给畜牧业带来的革命性的产品，大大提高养殖效率。

猪生长素释放因子基因质粒（安牠灵）

pGRF DNA Porcine Growth Releasing Factor DNA 猪生长素释放因子基因质粒（兽用） 【药品名称】 通用名称： 猪生长素释放因子DNA 商品名称： 安牠灵注射液 英文名称： Porcine Growth Releasing Factor DNA 汉语拼音： Zhukangling Zhusheye 【有效成份】 本品主要成份及其化学名称：双链环状脱氧核糖核酸(DNA) 化学组成 pGRF DNA由5,195碱基对组成。其碱基组成如下：

	A	G	C	T
碱基数目	1234	1344	1459	1158
%	24	26	28	22

质粒结构 pGRF质粒由下列各部分组成

	file:///C:/DOCUME~1/QINSHE~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image001.gif
			file:///C:/DOCUME~1/QINSHE~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image002.gif

载体序列

file:///C:/DOCUME~1/QINSHE~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image003.gifOri pUC19复制起点 KanR 卡那霉素抗性基因

GRF表达区

file:///C:/DOCUME~1/QINSHE~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image004.gifPromoter 猪骨骼α-肌动蛋白激活子和增强子 pGRF 猪生长素释放因子和前导序列cDNA Poly A 聚腺苷酸信号和3’非翻译区 质粒内切酶图谱 利用内切酶图谱鉴定pGRF质粒的结构，经内切酶切断的pGRF，用琼脂糖凝胶(1.2 %浓度)电泳显现片段)。

内切酶名称	内切酶位点	片段长度(bp)
Xho I	3	485, 2652, 2058
Hind III	2	4527, 668

file:///C:/DOCUME~1/QINSHE~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image006.gif 由左至右：第1和第27行：标记DNA (1 kb + Ladder,Invitrogen Inc.) 第2至6行：完整质粒 第7至26行：质粒的内切酶图谱 【性状】 本品溶于生理盐水或盐水加佐剂，呈无色透明液体。 【药理作用】 该质粒为表达生长素释放因子pGRF的载体。经肌肉注射后，目的基因pGRF具有在肌肉细胞内特异表达猪GRF蛋白的功能，刺激脑垂体产生内源性的生长激素(GH)，再促进类胰岛素生长因子(IGF-1)分泌，通过促进仔猪小肠绒毛的发育，最终促进猪的生长和降低料重比,提高猪的生产性能。同时，还具有增强猪体的免疫力以及缓解细菌性引起的高热肺炎症的功效。 【毒理作用】 本品无致突变作用；在亚急性毒性评价中，对猪单次肌肉注射5倍正常剂量的pGRF DNA，连续135天观察和检测，受试猪无任何不良的生理生化反应；其血液学指标、血液生化指标和器官系数等检测结果正常；病理组织学检查未表现出剂量反应关系，也不发生随试验期延长而加重的变化，因此，对猪的亚急性毒性较小，试验使用的剂量安全性较高。出栏时的残留水平至少比先前建立的“安全口服剂量(20mg/kg)”还低6250万倍。 由农业部农产品质量监督检验测试中心主持完成了急性经口毒性试验、小鼠骨髓微核试验、精子畸形试验、Ames试验、90天喂养(亚急性毒性)试验及传统致畸试验，结果表明肌肉注射猪生长素释放因子(pGRF) DNA生成猪肉食用性是安全的。 综上所述，可以认为pGRF质粒对猪、人及环境都是安全的。 【药代动力学】 本品注射入肌肉后，进入到注射部位的肌肉细胞，但不会整合到寄主细胞的基因组中，以非组合的形式存在并表达。药效在注射后可持续至35天；在猪只出栏前，绝大部分质粒被降解消失, 注射部位的质粒残留低于注射量的0.0003%。在注射后7日内,虽然有极少量漂散到心肝脾肾等内脏器官和血液中，但在血浆中DNA酶作用下很快全部被降解清除掉,各个脏器和血液内检测不出残留。 注射后35天，受试猪血液中GRF、GH和IGF-1含量水平得到提高，但都在正常生理范围内。在出栏阶段(注射后135天)，受试组与对照组已完全没有差异。 【功能与主治】 提高生产性能，促进生长；降低料重比，提高饲料利用率；缩短生长周期，提早出栏以及不会降低猪肉品质；增强仔猪机体免疫力，提高仔猪对高温的耐受性，缓解细菌引起的高热肺炎，减少仔猪死亡率。 【用法用量】 肌肉注射。在仔猪35-40日龄时，一次性(臀部)肌肉注射2ml(含4.5mg)。 【不良反应】 注射本品无任何不良反应。 【停药期】 考虑到质粒的残留,猪出栏前一个月停止用药。由于大中猪的注射增重效果不明显,建议只对35-40日龄的仔猪使用。因此,实际使用中不存在停药期问题。 【注意事项】 1 注射前针头消毒。 2 每注射10头，要更换针头。建议使用16g规格的针头。 3 插入(臀部)肌肉后，轻轻注射，并轻柔注射部位；尽量避免pGRF注射液回流溢出体外。 4 轻摇混匀pGRF注射液并待其温度为室温时使用。 【药物相互作用】 未发现本品与其它任何药物发生相互作用，造成药效减低或其它毒副作用。 【药物过量】 不建议过量使用，但使用过量也不会出现任何不良症状。 【规格】 4.5mg /2ml (支) 【贮藏】 4℃，避光密封保存。 【包装】 50ml/瓶(25头份/瓶)，20瓶/盒，6盒/箱 【有效期】 二年 【批准证书】中华人民共和国农业生物安全证书(生产应用)-农基安证字(2003)第008号 【生产企业】 企业名称：香港格兰柏生化科技有限公司 地 址：香港新界沙田生物科技路2号

boarsow

楼主：不好意思，我来给你泼泼凉水了！ 之前，我做论文的时候就有实验室的哥们做的是pGRF，且不说其效果不确切，光注射质粒造成的猪只体内转座子片断的存在极易产生局部遗传基因的改变。 猪肉是吃的，不是做试验的，这样的猪肉基因安全上存在一定的隐患。 我就不明白了，明明可以表达成蛋白质，干吗不生产pGRF蛋白，却一定要注射什么鬼质粒。 希望楼主慎重推广

boarsow

由农业部农产品质量监督检验测试中心主持完成了急性经口毒性试验、小鼠骨髓微核试验、精子畸形试验、Ames试验、90天喂养(亚急性毒性)试验及传统致畸试验，结果表明肌肉注射猪生长素释放因子(pGRF) DNA生成猪肉食用性是安全的。 这个是忽悠，这些片面性的试验不能保证DNA生成食品的安全性，基因突变是概率事件，不能用简单的几次试验来确信！！:5s:

iamtao216

搞成GRF蛋白就成激素了，残留更厉害，还不方便使用，持续期较短，如果你没有进行深入了解，请谨慎发言，没有研究就没有发言权。社会在进步，科技在发展，当初酶的使用不适也经历了从认识到普及的过程吗，任何新事物总要时间和实践来检验。目前农业部已经给产品发了“转基因安全证书”，安全性是没有问题的，不要谈转基因就谈虎色变，就像当初教会抵制“日心说”一样。相信生物技术会给我们带来更美好的生活和更高效的资源利用！ [ 本帖最后由 iamtao216 于 2008-4-11 14:10 编辑 ]

iamtao216

猪生长激素释放因子基因质粒(安牠灵)推广中客户关心问题解答 北京诚益农生物技术有限公司 新技术产品部 1. 安牠灵的产品性质、安全性？ 本产品由于其化学成分是核酸，是猪体内所本身所具有的物质，对猪的健康没有任何危害，对畜产品安全和人类健康也没有任何负面影响，也不会对环境生物安全有任何潜在隐患，是根本不同于“瘦肉精”类的绿色、安全、无公害产品，是生物技术对养猪业、对农民、对消费者带来的福音。作为严格管制的农业转基因产品，2000年1月向中国政府提出申请，2001年7月就被农业部“基因安全委员会”审批并发放中试批文。本产品的安全性是100%的。 通过“三致”检测实验表明，本品无致畸、致癌、致突变作用；在亚急性毒性评价中，对猪单次肌肉注射5倍正常剂量的pGRF DNA，连续135天观察和检测，受试猪无任何不良的生理生化反应；其血液学指标、血液生化指标和器官系数等检测结果正常；病理组织学检查未表现出剂量反应关系，也不发生随试验期延长而加重的变化，因此，对猪的亚急性毒性较小，试验使用的剂量安全性较高。出栏时的残留水平至少比先前建立的“安全口服剂量(20mg/kg)”还低6250万倍。 由农业部农产品质量监督检验测试中心主持完成了急性经口毒性试验、小鼠骨髓微核试验、精子畸形试验、Ames试验、90天喂养(亚急性毒性)试验及传统致畸试验，结果表明肌肉注射猪生长素释放因子(pGRF) DNA生成猪肉食用性是安全的。 综上所述，可以认为pGRF质粒对猪、人及环境都是安全的。 2. 安牠灵在实际生产中的效果？ 经华南农业大学、四川农业大学及广东、河北、浙江、福建等地各大猪场等先后对本产品在养猪生产上的使用效果做的长期、大量的精确测定表明，本产品的作用效果主要表现在以下几个方面： 加快商品猪生长速度。综合使用结果表明本产品可提高生长育肥猪增重7%～10%，或提前猪90千克出栏时间7～15天，节省饲料40～50千克/头，加快猪群周转，提高出栏率，每头猪可增加效益70～120元，投入产出比1:2.0～4.0。 改善商品猪胴体品质。本产品对商品猪胴体品质有明显的改善作用，可使瘦肉率提高3%～6%，眼肌面积提高10%～14%，三点背膘厚降低5%～8%，并增加肌间脂肪，改善肉质风味，使猪肉品质提高一个等级。 另通过生产实践发现，本产品还可以增强仔猪机体免疫力，提高仔猪对高温的耐受性，缓解细菌引起的高热肺炎，降低仔猪死亡率。 3. 安牠灵的注射是否会影响猪场免疫程序？是否影响其它疫苗的效果？ 经华南农业大学、广东东进农牧集团惠东猪场试验和使用结果，注射本产品可以促进仔猪的细胞免疫，增加淋巴细胞的含量，增强白细胞的吞噬作用，提高机体抗病能力；另和猪瘟疫苗、伪狂犬疫苗、PRRS疫苗等猪场常用苗同时注射，能增强疫苗效价，提高抗体滴度。因此注射本产品不会对其他疫苗效果造成不良影响，不会影响猪场正常免疫程序。 4. 安牠灵注射后有无不良反应？ 经大量推广实践证明，本产品注射后无过敏、应激等不良反应。 5. 是否会对肉质产生影响？对猪生长发育产生影响？ 四川农业大学关于pGRF基因质粒对商品猪肉质性状的影响研究结果表明，注射本产品均可降低背膘厚，增大眼肌面积。且其肉色和大理石纹评分均在3～4分的正常范围内。45min pH值均高于5.8，24h pH值均低于6.0，都在正常范围内。滴水损失值也正常。这表明，商品猪注射本产品对胴体品质有提高，能提高猪肉等级，但对肉质无不良影响。 华南农业大学研究表明，商品猪注射本产品后心、肺、肾、肝、脾等内脏器官生长发育正常，无不良影响。 6. 安牠灵注射后对猪群管理和饲料有什么特殊要求？ 商品猪注射本产品后要加强猪群健康监测，保证猪群健康，这也是保证产品效果的基础；饲喂采取自由采食、保证清洁饮水；饲料养分全价、平衡；如可稍提高蛋白比例(1%～2%)，并适量提高赖氨酸比例，这样可以保证机体蛋白合成效率，则能更好发挥产品效果。其他饲养管理程序按猪场原有程序进行，无特殊要求。 7. 注射日龄，中大猪注射有没有效果？ 本产品非激素类产品，完全按照动物生理特点发挥效果，因此注射－转化－表达－发挥效果有一个较长的过程。通过生产实践证明，商品猪35日龄、50日龄、65日龄、80日龄注射本产品后，生产效果呈阶梯状下降，35日龄注射效果最佳。因此建议在仔猪阶段注射，在中大猪阶段使用本产品投入产出比较小。 [ 本帖最后由 iamtao216 于 2008-4-19 15:17 编辑 ]

iamtao216

这么好的东西就没人关注？在原料、饲养成本高涨的情况下，应该进行一些变革。