葛根水煎液对未性成熟小白鼠子宫和卵巢组织形态结构的影响

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葛根水煎液对未性成熟小白鼠子宫和卵巢组织形态结构的影响 巴音吉日嘎拉1金晓2朝鲁孟1    1.内蒙古农业大学动物科学与医学学院 010018 2.内蒙古自治区动物防疫监督检验所010051

摘要 本实验研究，生后21天的未性成熟雌小白鼠14只，体重为19.13±2.23g，各窝随机分为对照组和实验组。给实验组灌胃葛根水煎液0.25ml，相当于每毫升含生药0.5g，对照组灌胃给于0.25ml 蒸馏水，其他条件都一样。每组每天灌药或蒸馏水一次，连续用16天，停药后把小白鼠切开颈部皮肤，切断颈动脉处死，剖腹取出子宫，卵巢称重。结果证明，葛根水煎液对小白鼠的体重没有明显的增重作用，对小白鼠子宫、卵巢有一定的增重作用。在组织形态学上，葛根水煎液对小白鼠的子宫腺体数量和卵巢的卵泡数量有明显增多作用。总之，葛根能促进未性成熟小白鼠的子宫、卵巢的发育。 关键词葛根子宫卵巢小白鼠     随着世界各国对天然药品需求的不断增加，天然药物在世界医药中的影响和地位日益受重视。中草药来于大自然属于天然药物，具有资源丰富，疗效确切，不良反应小等特点，中草药是历史悠久的传统药物，随着科学技术的进步和国内外新药研制开发中面临越来越激烈的竞争和挑战，新药研究的重点日益转向传统中药及天然药物活性成分的开发和利用，中药活性成分是其发挥药效作用的物质基础，它的深入研究是中药现代化的关键。揭示中药的作用机制，合理应用中草药才能充分发挥其新的药用价值。     葛根为豆科植物野葛或粉葛的根，具有发表解肌，升阳透疹，解热生津等作用，对心血管系统，免疫系统的疾病有较好的治疗效果。下面就将葛根及其主要有效成分的药代动力学研究、药理作用及临床应用综述如下[1]。     化学成分：葛根为豆科植物，分布在亚洲温热带的有30余种，我国约有10多种，以野葛和粉葛分布最广，产量最高，其根中主要含有（1）黄酮类：黄豆甙元和葛根素等；（2）葛根 A，B，C；（3）三 类主要以葛皂醇A，B，C命名的7种新型齐墩果醇烷型醇类化合物；（4）生碱类。     药代动力学研究：药物在体内的吸收研究表明，大鼠口服14C黄豆甙元0.5h后血内显放射性，大鼠口服近1h后，从胃肠道消失28%，此时尿中已有甙元排出，可见该药吸收较快。灌胃24h后，自粪便及胃肠道内容物回收的放射性物质占74。5%，说明该药胃肠吸收并不完全。另外，大鼠口服500ml/kg与50mg/kg后，药物自胃肠道消失率的对比实验未见显著差异说明上述吸收不完全与剂量关系不大，但增加口服剂量，可提高吸收的绝对量。药物在体内的分布在大鼠、兔、狗、人的实验中表明，葛根素在体内分布快且较广，静脉注射后药物在各组织中的分布以肾、血浆、肝中较高；睾丸、心脏、肌肉和脾次之。葛根素可通过血脑屏障进入脑内，但含量较低。蛋白结合率分别为32.5±4.4%，27.1±3.1%，24.6±3.5及15.8%。对比实验表明黄豆甙元血浆蛋白结合能力较葛根素强，有近半量（42.4%）可与血浆蛋白结合，这可能是影响其透过血脑屏障的原因。当用乙醇沉淀血浆蛋白时0.15%以上的药物能被乙醇提取出。说明甙元与血浆蛋白的结合校疏松。这种可逆性的结合对延长药物作用时间具有定意义。     药理作用：对心脑血管的作用（1）改善脑循环：葛根总黄酮注射于麻醉犬的颈动脉能使脑血流量迅速而明显地增加，脑血管阻力降低，给高血压动脉硬化的患者肌肉注射，则可使脑血管阻力减少，血流入时间缩短，波幅和快流段增加，波形好转，其作用温和，并非单向扩张血管增加血流，而是使低幅波升高，高幅波降低，使异常波趋向正常。（2）改善微循环作用：葛根素无论对正常金地鼠微循环，还是对局部滴加去甲肾上腺素引起的微循环障碍都有明显的改善作用，主要表现为增加微血管运动的振幅，提高局部微血流量。（3）对缺血心肌的保护作用：静脉注射葛根素能使犬中度缺血区的心肌血流量增加，进入缺血区的血流增多，但严重缺血区的血流量无明显改变。腹腔注射200mg/kg葛根素对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血有明显改善作用，采用低温体外循环下犬动物模型，用电镜观察从形态学方面证明葛根素对停搏140min的全心缺血心肌的超微活物具有良好的保护作用。这可能使葛根素对缺血心肌有保护作用的电生理基础，其对脑缺血有保护作用。（4）抗心律失常作用：葛根黄酮、黄豆甙元和葛根醇提取物对乌头碱、氯化钡、氯化钙、氯仿以及肾上腺素所致的心律失常有明显的对抗作用，说明葛根成分可能影响细胞膜对钾、钙、钠离子通道的通透性而减低心肌兴奋性，预防心律失常发生。     对免疫作用的影响：葛根使巨噬细胞的异物吞噬功能活化，而使初期感染状态下的异物排除功能增强；通过活化的巨噬细胞对细胞性免疫施以影响。     葛根素和葛根总异黄酮的雌激素样作用：葛根素和葛根总异黄酮对雌激素低下的动物显示弱雌激素活性，对正常雌激素水平的动物无明显雌激素样活性，而在合用雌二醇时，则部分抑制雌二醇的促子宫生长作用提示葛根素和葛根总异黄酮具有雌激素受体部分激动剂的特性[2]。     对大鼠乳腺、子宫的发育作用：葛根提取物能显著提高未成熟大鼠乳腺和子宫重量，能促进未成熟大鼠乳腺及子宫发育。还证明葛根提取物能增加大鼠血清促卵泡生成素（FSH）、促黄体生成素（LH）雌二醇（E2）含量，减低泌乳素（PRL）含量[3]。     以上研究结果来看，葛根对心脑血管有保护和改善作用，有抗促癌及诱导癌细胞的分化作用。葛根对母鼠生殖器官有显著作用，但葛根对子宫卵巢形态组织上的影响研究比较少，针对解决上述问题，进行了以下实验。 1材料及方法 1.1材料 1.1.1动物： 20日龄的未性成熟雌性小白鼠，内蒙古大学实验中心提供。 1.1.2药物：葛根，按常规水煎浓缩成0.5g/ml煎剂。 1.1.3 试剂与药品：固定液、HE染色液、各浓度的乙醇、透明液、二甲苯、冰醋酸等。 1.1.4仪器 显微镜、切片器、天平和其他实验室常规仪器。 1.2 方法     取14只小白鼠，将各窝小白鼠随机分成对照组、实验组，称重，适应环境一个星期，自由饮水，固体颗粒饲料（内蒙古大学实验动物研究中心提供）饲养，一天24小时的灯光来保持温度，温度（26±2）oC。第27天开始灌药，灌药时间早上，用药前称重，记录，一直保持到停药为止，灌药时先准备1ml注射器，然后保定小白鼠，实验组灌胃葛根0.25ml，对照组灌胃相等量的蒸馏水，其他条件同样。每组每天灌胃一次，连续16天。停药后的第二天，把小白鼠仰位保定在小板上，切开颈部皮肤切断颈动脉放血致死，剖服取出子宫、卵巢称重，放在配好的固定液内。然后把组织块修好后，在流水洗12小时以上。脱水透明，浸蜡等过程。然后修块焊块做切片，厚度为5um玻璃片上固定。然后用HE染色液进行染色，最后封片。 2结果 2.1葛根对小白鼠体重方面的影响（见表1和曲线1） 表1对照组和实验组的体重比较（g） 1—4天5—8天9—12天13—16天 对照组20.37±2.4222.78±1.7323.19±1.7924.18±2.65 实验组20.65±0.7822.79±0.04 24.41±0.80 25.43±1.47 曲线1对照组和实验组体重比较曲线 1-2d5-8d9-12d13-16d 结果表明,葛根对小白鼠的体重没有明显的作用。 2.2葛根对小白鼠子宫卵巢重量的影响（见表2） 表2对照组和实验组的子宫卵巢重量比较（g） 子宫卵巢重量（P）P/体重 对照组0.1000±0.06030.0039±0.0022 实验组0.1252±0.07730.0049±0.0029 结果表明，葛根对子宫卵巢重量有一定的增重作用。 2.3 组织形态学观察 （见表3）     对照组的卵巢结构为卵巢外层疏松结缔组织构成的，皮质比较宽，生长卵泡多，还有少数初级卵泡和闭锁卵泡（见图1）。     实验组的卵巢结构为皮质很宽，内含大量卵泡，皮质的基质是疏松结缔组织，髓质位于卵巢的内区，其中含有神经，许多大而卷区的血管和淋巴管，少数初级卵泡和闭锁卵泡，生长卵泡很多。有接近成熟卵泡，在颗粒细胞间尚未出现充满液体的腔-卵泡腔（见图2）。     对照组的子宫结构包括子宫内膜，肌层和子宫外膜。子宫外膜疏松结缔组织构成的，很明显，内膜上皮层柱状上皮，固有膜浅层细胞成分少，深层细胞成分较多，子宫腺体主分布于固有膜浅层，子宫肌内层深部血管比较发达（见图3）。     实验组的子宫结构也是包括子宫内膜，肌层，子宫外膜。子宫外膜：由疏松结缔组织覆盖腹膜间质构成。子宫肌：包括内环外纵行平滑肌层，两肌层间有大的动脉，静脉和淋巴管。内膜：固有黏膜下层的表层由疏松结缔组织构成，其中的细胞比表层的少的多。实验组跟对照组相比子宫腔发达，子宫腺体数量增多，子宫肌纤维层变厚两肌层间血管发达，子宫径增加（见图4）。 表3对照组和实验组镜下观察比较（个、ug） 卵巢生长子宫腺体子宫直径 卵泡数量数量 对照组23±016±48.8±3.5 实验组47±1024±89.0±2.8 3讨论：     子宫的发育受下丘脑垂体神经内分泌系统的调控，促性腺激素、性激素、生长激素可促进子宫和卵巢的发育，其中雌激素对子宫和卵巢的发育中起重要作用。研究证明葛根水煎液的主要成分是黄酮类和葛根素类，具有雌激素样作用，既促子宫及卵巢的发育[5]。本次研究证明，葛根水煎液能显著促进未成熟大鼠的子宫、卵巢的发育，使小白鼠的子宫卵巢的重量增加，还有小白鼠的子宫腺体数量和卵巢的卵泡数量明显增多。从组织学角度上也证明，葛根水煎液确实有有雌激素样作用，既促子宫及卵巢的发育。这结果与薛晓鸥等[2，3，4]结果一致。这可能是葛根水煎液中的雌激素样作用所致，即作用于下丘脑和垂体，促进FSH、LH、PRL分泌，增加内源性FSH、LH、PRL水平。发挥促进子宫发育的作用。卵巢是雌性的性腺，卵巢的周期改变产生性周期，下丘脑-垂体-卵巢轴三者之间是在相互影响，相互制约中维持着内分泌的动态平衡。葛根提取物能促进未成熟雌性小白鼠子宫、卵巢的发育，使子宫卵巢功能正常发挥，子宫重量增加，表明其对垂体-卵巢轴具有兴奋作用。也有认认为葛根具有植物激素可代替雌激素对机体进行调节，葛根水煎液中确有此类化合物[5]，能促进雌性卵巢与子宫的发育，部分是其直接作用于卵巢、子宫，部分间接作用于卵巢和子宫，是通过垂体-子宫-卵巢轴有调整作用[3]。其作用机理和葛根水煎液的有效成分待进一步研究。