动物体外诊断试纸卡在基地养殖场的应用的讨论

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猪 疾 病 快 速 诊 断 试 纸 问 答

问：诊断试纸检测的基本原理是什么？

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抗 体

抗 原

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答：猪疾病诊断试纸采用免疫胶体金层析检测技术——双抗原夹心法对病毒抗体进行检测。试纸采用一步法固相膜反应，当血清滴入加样孔后，溶液开始向显示窗口方向泳动，遇到干燥金标抗原溶解。血清中若含有相关的病毒抗体时，将会和胶体金标记的抗原形成免疫抗原抗体复合物，随溶液一起层析移动。在显示窗口的检测线（T）处，复合物中的抗体被预先包被的纯化抗原捕获截留，复合物中的胶体金颗粒形成一条紫红色线，如此则判定为阳性。线的颜色线深浅直接与抗体量的多少成正比。如果样品中没有相关的病毒抗体，则胶体金标记的抗原直接层析流过T处，T处保持白色，判定为阴性。溶解在样品溶液中的胶体金标记抗原被携带继续往前至质控线（C）时，被预先包被的抗体结合，形成一条紫红色线，证明本试纸有效。操作原理示意图见图1所示，整个试验仅需20分钟。操作简便、快速、准确、灵敏度高，直观、结果容易判定。

图1 免疫胶体金免疫层析原理示意图

问：诊断试纸怎样使用？有哪些使用的技巧与方法？ 答：① 采样部位的选择

表1 产品名称、采样样本及结果判断效价值

产品名称	适用样本	效价值
猪瘟病毒（HCV）	猪血清	≥对照卡中1∶16
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）	猪血清	≥对照卡中1∶40
猪圆环病毒（PCV）	猪血清	≥对照卡中1∶16
猪伪狂犬病毒（PRV）	猪血清	≥对照卡中1∶40
猪口蹄疫病毒（ FMDV ）	猪血清	≥对照卡中1∶40
猪弓形虫（TOXO）	猪血清

【注】：样品采集部位的正确选择对临床样品检出的准确性具有重要影响！ ② 血清与血浆的区别？哪个检测效果更好？

血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。

区别：1、在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原；2、在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。

为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。建议您采用血清样品，对检测效果更加准确。

③ 实验每次需要多少血清量？加入量是否有限制？

实验每次滴加血清的量在2-3滴，数值在80-100 ul，由于检测区内膜上包被抗原的量是固定的，加入量差20 ul对实验的结果没有很大影响，但试纸的液体饱和度有限制≤3滴，所以，您只需要往加样孔加入2-3滴血清即可。

④ 实验结果怎样判断？什么时间判定结果最合适？

对于猪疾病的诊断试纸，每种疾病的都有一张比色卡，在加入样品后的20分钟内，观察窗内色带与对照卡的色带滴度进行参照，可大致判断出抗体效价的高低。

⑤ 结果显示后的说明情况，以猪口蹄疫病检测为例：

1．被检样品检测线（T）条带的色泽≥对照卡中1∶40（效价）位置条带色泽时，说明样品中猪口蹄疫病毒抗体的滴度较高，暂不需要进行疫苗的接种免疫。 2．被检样品检测线（T）条带的色泽＜对照卡1∶40（效价）位置条带色泽时，说明样品中猪口蹄疫病毒抗体效价不够抵御猪口蹄疫病毒强毒攻击的最低保护滴度，该进行疫苗接种。 3．被检样品检测线（T）处无明显色带出现，说明样品中没有猪口蹄疫病毒抗体。即使猪群健康，也应当及时进行疫苗接种 4．当被检样品检测线（T）条带的色泽特别深时，被检猪即使接种了疫苗，也可能被强毒感染。 问：试纸在临床上具体有哪些应用？ 答：1、用于检验疫苗的质量，以及确定免疫的最佳使用剂量 养殖者每次最好购买同一批号生产的疫苗。在进行疫苗质量检测及确定最佳使用剂量的时候，从中取一瓶疫苗，选择同一时间段的乳猪、仔猪、种猪若干头，分别注射不同剂量的疫苗进行免疫接种，免疫后15天采血，用免疫金标试纸测定抗体滴度，根据测定后抗体效价值，从中选择免疫头份少，抗体滴度高作为本批号疫苗最佳免疫剂量。 如果效价值达不到免疫保护最低水平，则应当检查是否是疫苗本身问题，亦或是猪群存在有免疫抑制病毒(如圆环病毒)等的干扰。 2、科学地制定仔猪的首免时间 仔猪的首免时间确定受许多因素的影响，如母源抗体的水平高低、仔猪是否吃到初乳或吃到初乳量的多少，确立仔猪的首免时间可以采用动态监测仔猪抗体水平的高低，不同猪群采用个性化的免疫程序，免疫胶体金试纸为动态监测提供了技术支持。 3、监测怀孕母猪抗体水平，为母猪及仔猪提供合理保护（以猪瘟为例） 当母猪分娩时，用猪瘟抗体免疫金标试纸条检测母猪的抗体水平。如果猪瘟抗体效价＜1:16，说明母猪体内的猪瘟抗体滴度无法抵抗猪瘟强毒攻击的最低保护抗体，母猪应当及时进行猪瘟疫苗接种，同时乳猪应当及时采用超前免疫，以免发生猪瘟病。如果母猪检测猪瘟抗体效价＞1:16，说明体内的猪瘟抗体滴度较高，可以抵抗猪瘟强毒的攻击，乳猪不需要进行超前免疫，乳猪可通过母乳获得母源抗体而达到保护，乳猪可按照正常的免疫程序进行免疫保护。 4、对家畜流动性频繁的地区，可开展疾病的前期筛查工作，减少传染病的区域传播 当从外地区或外省购进大批量仔猪或种猪时，购买者无法了解购买的猪只免疫情况。通过随机抽选猪只，进行免疫金标试纸的快速检测，根据检测结果采取相应的措施，并且可以了解整群的免疫水平，为下一步的免疫奠定基础，若是出现发病状况，也能及时采取合理的防治措施，减少购买者的最低经济损失。 5、怀疑猪场猪群发病，对发病情况的监测 怀疑猪场发生猪瘟病时，采集病猪血清（血液）用金标检测试纸检测。如果是发生猪瘟病时，检测没有抗体或抗体滴度很低，可作为发生猪瘟病的诊断参考。当然，发生过猪瘟病后痊瘉的，抗体滴度可能会很高。

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