一. 稀释前的准备
1. 采精室的准备
2. 实验室的准备
1)在稀释前2h左右做好稀释液置于38℃水浴锅内保存(保存期24小时内)。
2)将室温维持在25℃左右,稀释过程中严禁开关门窗,以防室温升降明显。
3)将稀释器材预热保存(集精杯处理后,杯、盖分离置于38℃干燥箱预热,输精瓶,量桶,玻璃棒,温度计,盖玻片,载玻片置38℃干燥箱预热,显微镜,精子密度仪,全自动精子质量分析系统,恒温载物台,电子称调整精准等)。
二.精液稀释处理
1.采精员将采集的精液(无菌操作)通过双层窗口交给实验室工作人员。
2.稀释人员洗手、消毒、更衣后将集精杯于采精窗口内取出并迅速检查精子活力、密度、颜色、气味并做好记录。注意:此过程中不要将精液袋从保温杯中取出。
3.将精液袋取出置于预热后的量桶内称重并测温。
4.将稀释液从水浴锅内取出,调整温度与原精液相差不超过1℃
5.利用玻璃棒引流缓缓把稀释液注入原精液。
注意:1)温度计选择同一厂家(在相同环境下刻度相同);
2)不要将计算所得的稀释液的量一次性的注入精液中,过程中要阶梯性的注入并检查精液稀释过程的活力,用玻璃棒缓慢同一方向均匀搅拌。
三.精液品质的检查
原精活力:作直线运动的精子占精子总数的百分比;精子密度:每毫升精液中所含的精子数(2-3亿左右);射精量:成年公猪300-500ml.青年公猪200-300ml 颜色:乳白色或浅灰色,精子的密度越高色泽越浓。 气味:略带腥味;采精频率:成年公猪每周2-3次为宜,青年公猪每周1-2次为宜,精液稀释倍数:要求每个输精剂量含有效精子数30亿以上,输精量 80-100ml,以确定稀释倍数。合格精液标准:150ml以上,颜色正常,活力0.7以上。
精液品质检查可应用相差显微镜、精子密度仪或全自动精子质量分析系统进行检查。
四.精液稀释完成后迅速分装记录
将瓶装精液置于保温箱(泡沫箱)中盖上毛巾让其于室温中缓慢降至20-25℃在将其放入17℃恒温箱保存并每隔8-12h缓慢翻动一次,以防精子堆积。
注意:分装后要将瓶内空气挤出拧紧瓶盖,以防空气中微生物对精液的影响和防止运输时精液的剧烈晃动。
五.消毒清洁处理
稀释人员要对实验室操作流程熟悉,稀释过程中要精准,迅速,以防止精液温度下降过快,整个稀释过程结束后要清理实验室,消毒清洗使用工具,用毛巾侵入消毒水擦拭室内台面、水龙头、地面。确认无误后方可下班。
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