盐酸甜菜碱安全性的初步评价

wlei908

                             盐酸甜菜碱安全性的初步评价

                                                       汪以真1，王友明1，傅剑云2

(1浙江大学 饲料科学研究所 教育部动物分子营养学重点实验室，浙江 杭州310029；2．浙江省卫生防疫站，浙江 杭州 3lOO08)

摘要：通过大鼠、小鼠急性经口毒性试验，大鼠蓄积毒性试验、致突变试验(小鼠微核试验和小鼠精子畸形试验)，探讨了盐酸甜菜碱作为畜禽饲料添加剂的安全性。结果表明，盐酸甜菜碱属实际无毒类物质，无明显蓄积作用，无致突变性，是一种安全的饲料添加剂。

关键词：盐酸甜菜碱；安全性；评价；饲料添加剂；小鼠；大鼠

甜菜碱的化学本质是三甲基甘氨酸，在动物体甲基代谢中起着非常重要的作用。它能促进畜禽生长，降低胴体脂肪沉积，提高畜禽胴体品质和肉的色、香和味。因而，广泛用于畜禽饲料添加剂。甜菜碱的毒性较小，大鼠静注2.4g/kg未见毒性产生,小鼠皮下注射LD50为l8.1 g/kg,但有关盐酸甜菜碱的安全性毒理学评价尚未见报道。

l.材料与方法

1.1 受试物


　　盐酸甜菜碱，浙江大学饲料科学研究所生产，样品为白色晶体。

1.2 动物

昆明种小鼠，浙江省药检所实验动物中心提供(合格证号：浙动字第22-9601017)；SD大鼠，浙江省实验动物中心提供(合格证号：浙实验动物质量准字96001号)。

1.3 阳性对照物
　　环磷酰胺，上海第十二制药广生产。

1.4 急性毒性试验
　　取健康小鼠、大鼠各4O只(小鼠体重18～22g，大鼠180～220g)，观察1周后，随机分成4个剂量组(每组10只，雌雄各半)，即2.15、4.64、10.00和21.50g/kg。样品用蒸馏水配制，按等容量法(小鼠每10g体重0.2ml,大鼠每100 g体重2ml)灌胃接毒。采用24h一次经口灌胃方式。染毒后，每日观察动物中毒症状和死亡情况．记下2周内动物数。采用Horn法计算LD50及其95%可信限。

1.5 蓄积毒性试验

取健康大鼠50只，体重(200土20)g，采用20d蓄积法按体重随机分组，每组10只，雌雄各半。按1/20、1/10、1/5、1/2 LD50剂量，设样品每公斤体重0.3、0.6、1.2、3.0g 4个剂量组和蒸馏水对照组。样品用蒸馏水配制，经口每天灌胃1次，连续20d，每4d称重1次。

试验开始至染毒结束后7d．每天观察大鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况。根据大鼠死亡情况确定蓄积毒性强度。用t检验法检测染毒4、8、12、16和2Od 以及停止染毒后第7天各剂量组与对照组大鼠体重的差异性。

1.6 骨髓微核试验
　　取健康小鼠5O只(体重22～26 g)，随机分成5组，设样品每公斤体重1.25、2.50和5.00 g 3个剂量组,另设空白对照(蒸馏水)和阳性对照(环磷酰胺40mg/kg)。每组lO只小鼠,雌雄各半,样品用蒸馏水配制,按每10 g体重0.1 ml计算灌胃量。采用间隔24 h
2次给样品，第2次给样后6 h处死动物，取其胸骨骨髓制片，甲醇固定，Giemsa(pH=6.4)染色，镜检。每只动物观察1000个骨髓嗜多染红细胞(PCE)，同时计数正染红细胞(NCE)及含微核的嗜多染红细胞(MNPCE)，计算微核千分率(MN‰)，以卡方检验法检测受试物剂量组与阴性对照组间差异的显著性。

1.7 精子畸形试验

取健康雄性小鼠50只(体重23～27g)，如上1.6分组。样品用蒸馏水配制,按每10g体重0.1m1计算灌胃量。每天灌胃1次，连续5d，对照组也同样处理。在首次给样品的第35天，颈椎脱臼处死小鼠，取两侧附睾，放入盛有生理盐水的平皿中剪碎，经4层擦镜纸吸滤，直接涂片，自然干燥，甲醇固定，用1% 伊红染色，高倍镜下检查精子形态。每只小鼠检查完整精子1000个，记录畸变精子的类型和数目，计算畸形率(%)。同样以卡方检验法检测差异的显著性。

2 结果与讨论

2.1 急性毒性试验

见表1。经Horn氏法计算，盐酸甜菜碱对小鼠雌、雄性经口LD50值为5.84g/kg,95%可信限为4.3O～ 7.94 g/kg；对雌性大鼠经口LD50值为6.81g/kg,对雄性大鼠

经口LD50值为5.84 g/kg,95%可信限为4.3O～7.94 g/kg。根据急性毒性分级标准，该样品为实际无毒类。

                                       

2.2 蓄积毒性试验


　　见表2,3。 试验期间各组大鼠呈阶段性增长。在同一染毒时间中，各剂量组大鼠的体重与对照组比较无显著差异性(P>0.05)，停止染毒后第7天，0.3、1.2和3.0g/kg剂量组雌性大鼠的体重分别比对照组增加明显(P<0.05),但雄性大鼠各剂量组体重未见明显增加。试验大鼠死亡情况无剂量反应关系。可以认为盐酸甜菜碱无明显蓄积作用。

                                                          

2.3 骨髓微核试验


　　见表4。阳性对照物(环磷酰胺)可引起小鼠骨髓细胞微核率明显升高，与阴性对照组比较，差异极显著（P<O.01)。而在盐酸甜菜碱各剂量组，中、低剂量组细胞微核率有所升高，但与阴性对照组比较．差异不显著(p>0.05)，表明盐酸甜菜碱小鼠微核试验结果为阴性。

                                

2.4 精子畸形试验


　　见表5。环磷酰胺可引起小鼠精子畸形率明显升高，与阴性对照组比较差异极显著(P<0.01)。3个剂量组精子畸形率与阴性对照组比较差异不显著(p>0.05),表明盐酸甜菜碱小鼠精子畸形试验为阴性。

                           

参考文献
略

Evaluation on Safety of Betaine Hydrochloride

WANG Yi- zhen1，WANG You-ming1，FU Jia- yun2 (1.Feed Science Institute,Zhejiang University,the Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed of Chinese Agriculture Ministry，Hangzhou 310029，China；2.Zhejiang Health and Anti-epidemic Station，Hangzhou 310009，China)

Abstract：In order to evaluate the toxicology of safety of betaine hydrochloride，the general tests for acute，accumulative toxicity in
mice and rats:the special tests for effects on mutagenicity (the micronucleus test for cytogenetics analysis in mice and rats.the test for sperm abnormality in mice)were conducted．The results of above-mentioned tests showed that betaine hydrochloride have no toxicity,accumulation toxicity and mutagenicity and can be used as safe feed additive.

Key words：betaine hydrochloride;safety;evaluation;feed additive;mouse;rat

又见新月

这么详细的实验数据

wlei908

甜菜碱证明是确实安全无毒的物质，广泛应用在饲料，医药，发酵，化妆品等行业

wlei908 于 2010-4-8 04:10 补充以下内容

未见对粪便有影响的报道