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[资料] 高免血清及卵黄抗体的制备技术

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发表于 2009-2-11 15:51:33 | 显示全部楼层 |阅读模式
免疫血清
  1.动物的选择
可作为免疫用的动物多为哺乳类和禽类,主要有家兔、绵羊、马、猪、驴、豚鼠和鸡等,其中实验常用家兔、绵羊、鸡和豚鼠。选择动物时要注意以下几个方面:
  a.抗原与动物种系
动物性抗原的免疫原性,随动物种系远近而有差别。近缘动物的蛋白质免疫原性弱,反之则强。因此选择动物时应选用亲缘关系较远的动物。
  b.免疫血清的用量
所需要的免疫血清,如是经常大量地使用,选择免疫动物时则应选择大动物;如所需的免疫血清量不大,则以选择小动物为宜。
  c.动物的个体状态
用于免疫的动物必须是适龄、健壮、无感染的动物。免疫过程中应特别注意营养和卫生管理。注射抗原1个月后,动物仍无良好的抗体反应,或在规定注射日程后抗体效价不高,可再注射l2次,若仍不佳者立即弃去.
  2.抗原制备与接种
制造抗血清,根据产品不同,所用抗原、制法亦有所不同。病毒性抗血清,一般是用本动物的含毒组织作抗原,首先把强毒接种本动物,使其发病,采取其含毒性组织作为抗原,注射于免疫动物。细菌性血清,是用抗原性好的强毒或弱毒菌种,接种于规定培养基内,于37培养,细菌发育良好者,以纯粹检验后用作抗原。

抗原接种:动物在免疫过程中分为基础免疫及高度免疫。基础免疫一般是注射疫苗,然后连续多次注射强毒进行高度免疫,每次注射剂量,要随着注射次数的增加而增加。接种抗原的次数和剂量,应根据制造抗血清的品种和动物健康情况加以调整。为了获得效价高的抗血清,动物饲养条件必须保持良好。
  3.血清抗体的检测
免疫程序接近结束时,测定血清的抗体效价,如果效价已达规定的要求,即可视作免疫成功,开始采血。若经试血,血清效价不合格,则可继续增加注射抗原次数或剂量,如再试血仍不合格,应将动物淘汰。

测定免疫血清效价是及时掌握采血时机的重要步骤。常用的有环状沉淀反应(包括抗原稀释法和抗体稀释法)和双向琼脂扩散试验。

用琼脂扩散试验测定血清效价时,如果在抗原孔与抗体孔之间出现沉淀线者,即为阳性。最高稀释倍数血清孔出现沉淀线,即为该血清的抗体效价。琼脂扩散试验的效价通常比环状沉淀反应稍低。
  4.血清采集与提取
免疫后,经试血,抗体滴度达到要求后可采血。动物采血应在上午空腹时进行,禁食一夜,可避免血中出现乳糜而获得澄清的血清。不论免疫动物是大动物或小动物,采血方法均分一次放血和多次放血法两种。

  a.一次放血
绵羊或其他大动物可用颈动脉放血,家兔、豚鼠和鸡则可通过心脏直接采血。

  b.多次少量放血法
大动物可通过静脉采血,家兔、豚鼠和鸡等小动物可通过心脏采血。


免疫血清的分离应在无菌条件下进行,并应尽量防止溶血。采血用的器械、容器等用前要进行灭菌,以无菌操作采血,注入斜放的大试管或三角瓶内,待凝固后分离血清,将多份分离出的血清混合,待检。
  5.免疫血清的检验
免疫血清的检验包括无菌检验、安全检验和效力检验。无菌检验按成品检验的有关规定进行;安全检验通常用体重1822g的健康小白鼠5只,各皮下注射血清0.5ml,用体重250450g的健康豚鼠2只,各皮下注射血清10ml,观察10天,均应健活,效力检验则按各种抗血清规定方法进行。
卵黄抗体
  免疫血清和卵黄抗体是紧急预防和早期治疗相应传染病的有效制剂。为了降低成本,增加产量,提高治疗效果,对健康母鸡进行法氏囊病高度免疫,取其卵黄来防治法氏囊病,不但省去杀鸡分离血清的麻烦,而且具有产量高、效果好、价格便宜等优点。现以法氏囊病为例,简要阐明高免卵黄抗体的制备。
1.制造用鸡的选择
选择健康的蛋鸡,隔离饲养观察l周后无特殊反应者,方可免疫。
  2.疫苗免疫
通常使用组织灭活苗,其制备过程如下:
  a.制备鸡的选择 选4050日龄SPF鸡,用通过SPF鸡传代的野毒滴鼻、点眼,每只鸡接种0.20.3ml,在4872h左右死亡的鸡,无菌采集其法氏囊,并作病变观察,将病变典型的法氏囊低温保存备用。
  b.制苗 取10g病料加100ml0.5%甲醛生理盐水,匀浆、冻融、过滤,滤液加8%甘油,置371824h灭活,即为水剂灭活苗,也可加白油等佐剂,制成油乳剂灭活苗。
  c.无菌检验 取灭活苗05ml接种于普通琼脂斜面及厌氧肉汤培养基各一支,于37培养48h,应无菌生长。
  d.安全试验及保护试验 经无菌检验合格的灭活苗,给4050日龄SPF鸡或未经法氏囊疫苗免疫过的健康鸡,肌肉注射、滴鼻、点眼、接种0.30.5ml,观察半月,无法氏囊病发生者,可用110强毒0.5ml/只攻毒,观察l014天,无发病者为安全有效。
  免疫程序 第一次免疫,每只鸡肌肉注射lml,经710天后进行第二次免疫,每只鸡2ml7天后用琼脂扩散方法测定卵黄抗体效价,如已达到164以上,即可收集高免蛋,如效价不高,可隔7l0天进行第三次加强免疫。
  3.高免卵黄抗体的制备
  a.高免蛋的处理 高免蛋用0.1%新洁尔灭溶液浸泡5min,洗涤干净,放入无菌室晾干备用。

  b.分离卵黄 无菌操作,打破蛋壳,分离蛋黄。

  c.卵黄匀浆 收集的蛋黄置无菌的组织匀浆器中,加等量灭菌生理盐水,并按每毫升加入青霉素、链霉素各1000单位,硫柳汞1.0/万,匀浆、过滤,分装消毒瓶内,4冷藏备用。

  4.高免卵黄抗体的检验

  a.无菌检验 取0.5ml高免卵黄抗体,分别接种于普通琼脂斜面和厌氧肉肝汤培养基,37培养2448小时,应无细菌生长。

  b.安全检验 取30日龄健康鸡10只,每只鸡肌注卵黄抗体2ml,观察57天,应无任何不良反应。
  c.中和试验 取30日龄健康鸡20只,随机分成2组。试验组每只鸡皮下或肌肉注射野毒和卵黄抗体(110)混合液1ml,观察饲养1015天,应全部存活,对照组每只鸡皮下或肌肉注射野毒1ml,观察1015天,应部分或全部死亡,剖检后出现典型病变。

  d.卵黄抗体效价测定 用琼脂扩散反应测定,抗体效价应在164以上。

yangtao588688 于 2009-2-11 16:22 补充以下内容

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发表于 2009-2-15 16:00:16 | 显示全部楼层
方法很简便,就是法律不允许做!
发表于 2009-2-16 11:29:02 | 显示全部楼层
理论和实际是差很远的。教科书一大堆,有用产品一丁点。
发表于 2010-12-1 15:38:30 | 显示全部楼层
有没有保存期限和条件呢,具体一点的
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