药敏实验的病原菌如何培养？

wangyanzhensuo

请大家帮帮忙！我对病原菌的培养不会！请帮助！:huahua:

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是临床上做药敏吗 直接那动物细菌多的地方涂到平皿上就可以了

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用琼脂培养基平皿培养！

l24029789

培养基会做吧? 最简单的办法就是留肝 用肝在培养基上涂一层,之后放好药敏片,放入恒温箱,过6小时→OK

l24029789 于 2009-10-9 18:30 补充以下内容

如果你需要培养基的配方 可以留言

anfu123

啥方？可以分享分享吗？

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体外抗菌药物敏感试验
一、抑菌试验
试验方法主要有定性测定的纸片琼脂扩散法（disk agar diffusion tesk, Kirby-bauer tesk）、定量测定的稀释法（dilution tist）和E试验法（E-test）。
(一) 纸片琼脂扩散法
1.基本原理   
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
2.试验方法
⑴ 培养基的制备
普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买。做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基。
⑵ 药敏片的制备
① 药敏片的制备
取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
    ② 抗菌药纸片制作
在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
    ⑶ 试验方法
① 于纯培养平板上，挑取相同的菌落4～5个（图12-1a）。
② 接种于3～5ml水解酪蛋白（Mueller-Hinton,MH）肉汤中，经35℃培养6～8h(图12-1b)。
③ 用无菌生理盐水或MH肉汤校正菌液浊液，使其与标准比浊管的浓度相同(图12-1c）。校正过的菌液（一般为0.5麦氏单位）在15min内接种完。
④ 用无菌棉拭蘸取校正过的菌液，在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个MH平板表面，反复数次，每次旋转平板60°(图12-1d)，使整个平板涂均匀。
⑤ 涂布菌液的平板于室温中干燥3～5min后，用纸片分配器或无菌镊子取药敏纸片，贴于平板表面，并用镊子轻压一下纸片，使其贴平。每张纸片的间距不小于24mm，纸片的中心距平板的边缘不小于15mm，90mm直径的平板宜贴6张药敏纸片(图12-1e)。（6）将贴好纸片的平板置35℃培养18～24h后，用标尺量取抑菌圈直径(图12-1f)。
3.结果判断　
根据抑菌圈的大小（不同抗生素其抑菌圈大小的标准不一致），判断为敏感（S）、耐药（R）或中度敏感（I）。某些细菌可蔓延生长至某种抗生素的抑菌圈内，如磺胺抑菌圈内可能有微量的细菌生长，可忽略不计，应以外圈为准。
   
(a)                                             (b)                          (c)
   
(d)                                  (e)                             (f)
图12-1　　Kirby-Bauer法试验程序
（a）挑取菌落（b）转种肉汤（c）比浊（d）涂布平板上（e）放置药敏纸片（f）量取抑菌圈大小
（二）试管稀释法
即最低（或最小）抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）的测定。
1.基本原理　
在肉汤中将抗菌药物进行一系列（对倍）稀释后，定量接种待检菌，35℃培养24h后观察，抑制待检菌肉眼可见生长的最低药物浓度，即为该药物对待检菌的最低抑菌浓度。
2.试验方法　
取无菌试管26支，排成两排。另取3支试管，分别作为肉汤对照管、待检菌生长对照管和质控菌生长对照管。每管加入MH肉汤2ml，在第1管加入经MH肉汤稀释的药物原液（256mg/L）2ml混匀，然后吸取2ml至管2管，混匀后再吸取2ml至第3管。如此连续对倍稀释至第13管，并从第13管中吸取2ml弃去。此时各管含药浓度依次为128、64、32、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/L。第1排试管每管加入待检菌菌液（1×107菌落形成单位（CFU）/ml）0.1ml，第2排试管每管加入标准菌菌液（1×107菌落形单位(CFU)/ml）0.1ml，最终接种菌量约为5×105 CFU/ml。置35℃培养箱中培养18～24h。观察有无细菌生长。
3.结果判断　
药物最低浓度管无细菌生长者（对照管细菌生长良好），即为待检菌的最低抑菌浓度（MIC）。(图　12-2)

图12-2  MIC测定的试验结果
左起第四管为药物最低浓度而无细菌生长，即待检菌的MIC。
（三）E试验法
1.基本原理　
该方法结合扩散法和稀释法的原理和特点，操作简便如扩散法，但可以同稀释法一样直接定量测出药物对待检菌的MIC。其试条为商品化塑料试条，长50mm,宽5mm，内含干化、稳定、浓度由高至低呈指数梯度分布的某种抗菌药物。可用于各种常见菌、微需氧菌、分枝杆菌、厌氧菌和真菌等的药敏试验。酵母菌和霉菌的药敏试验是一项新的技术，由于影响因素较多，直接药敏试验为困难，E试验法由于结果准确、稳定，受到认同。
2.试验方法　
菌液、平板接种等同纸片琼脂扩散法（厌氧菌、隐球菌和其他菌悬液浓度为1个麦氏单位，其他细菌为0.5个麦氏单位）。将E-test试条轻放在接种、干燥后的琼脂平板上（90mm平板放置1～2条），置一定条件下培养：厌氧菌置厌氧环境培养48h，微需菌置5%～10%二氧化碳环境培养24～48h，隐球菌培养48～72h，其他细菌培养24h。
3.结果判断　
培养后围绕着试条可形成一个卵圆形的抑菌圈，抑菌圈与试条的横向相交处的读数刻度，即是该抗菌药物对待检菌的MIC。(图12-3，图12-4)

图12-3　　E试验示意图

图12-4 E试验法的试验结果
（a）常见菌的试验结果（b）苛养菌的试验结果（c）厌氧菌的试验结果（d）酵母菌的试验结果（e）真菌的试验结果

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一般用营养琼脂培养就可以。