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发表于 2007-1-11 21:29:14
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7.生态学
本病传播主要是通过健禽直接接触病禽或间接摄入被病禽呼吸道分泌物和粪便等污染的垫料、饲料或饮水。毫无疑问,传播的主要方式是活禽运输,因将处于潜伏期和发病早期的病禽混在健禽中,使整群受到感染。污染的运输工具和禽舍也是重要的传染来源。病禽的肉尸、内脏和下脚料处理不当,也是本病传播的重要原因。有人认为病禽所产的蛋在传播疾病上具有重要作用,看来并不十分可靠。虽然鸡群在发病早期所产的蛋中,被NDV感染者可能多达30%,但这种鸡胚都死亡,似乎不能孵出雏鸡。因此,感染的主要危险是病蛋破损,污染孵化器。温和型新城疫病鸡容易成为持久性传染源,因长期不断排出病毒,造成疾病的连续传播,特别在大群舍饲鸡群中更是这样。曾有雉、塘鹅和其它野禽自然发生本病的报道,说明许多野禽可能是病毒的机械携带者。国内外均报道从外观健康的家鸭泄殖腔分离获得NDV,分离率高达6.5%~9.3%,其中包括强毒株,这在流行病学上有着重要意义。?
8.诊断
急性新城疫的初步诊断,通常根据病史、临床症状和尸体剖检即可作出。但温和型新城疫较难作出确切诊断,在没有神经症状的情况下,可能与其它呼吸道疾病混淆,特别是在鸡群中本来就有其它呼吸道感染时,则必须进行病毒分离或血清学诊断。?
(1) 病料采集
从感染后3~5天病禽的呼吸道分泌物或肺组织中,很易分离到病毒。全身症状比较严重的病例,病毒很易从脾脏、血液中分离获得。脑组织的病毒分离率较低。接种过疫苗的鸡发生感染时,采集病料的时间应推迟至6~14天。?
(2) 分离培养
最好应用9~11日龄的鸡胚。种蛋必须来自健康母鸡,并且没有新城疫抗体。将病料作尿囊腔接种,置37~38℃培养,每天照蛋,连续5天。强毒和中等毒力毒株常使鸡胚在36~96小时死亡。鸡胚全身充血,头和翅等处出血,尿囊液清朗,内含大量病毒,呈现较高血凝性。弱毒株可能不使鸡胚死亡,但鸡胚液能凝集红细胞。可疑病料如果不使鸡胚死亡,不要轻易作出否定结论,应取鸡胚组织在尿囊液中磨碎,制成悬液,继续接种鸡胚盲传3代。?在某些情况下需要接种易感小鸡时,可通过呼吸道或肌肉接种。?
(3)检查病毒抗原
免疫组化技术能证明组织和器官中存在的特异性病毒或抗原,提供快速的诊断方法。气管切片或压片免疫荧光法和气管切片免疫过氧化物酶法已应用于NDV感染的检验。?也可应用细胞培养物分离NDV,最好是鸡胚成纤维细胞或鸡胚肾细胞。有些毒株在细胞培养物中不出现细胞病变。如作蚀斑检查,覆盖琼脂中必须含有镁离子和DEAE才能使某些毒株出现蚀斑。蚀斑出现于感染后24~72小时。?
(4)血清学
家禽血清中的新城疫抗体可被多种试验检出,包括血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、单相辐射免疫扩散、单相辐射溶血、琼脂扩散、鸡胚中和及蚀斑中和试验。其中血凝抑制试验是最常用的。酶联免疫吸附试验已普遍应用。作为鸡群监测程序的一部分而进行血凝抑制试验时,可采取待检血清,与已知血凝性良好的NDV作试验。尿囊液中可加入0.1%福尔马林将病毒灭活。待检血清作连续倍倍稀释,每一稀释度为0.25ml,与0.25ml已知病毒悬液(4个血凝单位)混合,静置5分钟后加入0.25ml 0.5%~1%鸡红细胞。混合后置20℃~30℃经15~30分钟观察结果。当然也可在微量滴定板上进行微量血凝和血凝抑制试验。鉴定病毒时,将感染尿囊液与已知抗血清作同样检查。血凝抑制试验比中和试验简单快速。血凝抑制价在1:20以上者,肯定被检鸡过去患过新城疫或接种过新城疫疫苗。血凝抑制抗体在体内的持续时期比中和抗体短。对在细胞培养物中不产生细胞病变的毒株,可
用血细胞吸附和血细胞吸附抑制试验加以鉴定。中和试验常用固定血清-稀释病毒法。过去从未接触过NDV的正常鸡血清能中和高达100ID50的病毒,因此必须高于此值才能判为阳性。在10~20天前感染新城疫的鸡,其血清通常能中和103~106ID50的病毒。NDV各毒株在抗原性上没有区别,但是产生中和抗体的能力却有差异。
(5)病毒特性鉴定
就NDV而言,普遍存在缓发型毒株,因而即使分离出NDV,也很难确诊本病。为了确诊,进一步作病毒特性鉴定,例如致病性试验是必要的。?
A. 致病性试验
由于以临床症状衡量病毒的真正毒力不一定可靠,有必要进行病毒致病性的实验室评估。有3种体内试验可用于此目的:①感染一个病毒最小致死量的鸡胚平均死亡时间(MDT);②一日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI);③6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)。
B. 体外致病性试验
如上所述,只有NDV在F0的分裂位点上具有附加碱性氨基酸,胰酶蛋白酶等才可作用于F0,使其具有感染性。因此,NDV分离物在无胰酶的细胞培养上物形成蚀斑的能力,可成为一种简单的体外检查病毒毒力的方法。
C. 单克隆抗体
NDV的单克隆抗体除用于常规诊断之外,在基本特性分析基础上,可将单克隆抗体用于对分离物的鉴定和病毒分组。这种以抗原特异性为基础的分型是诊断和流行病学分析的有力手段,能迅速分组和鉴别分离到的NDV 。
9.免疫
目前大多数国家都采用预防接种作为控制新城疫的主要措施。根据具体情况,不同国家制备和应用各种不同的弱毒疫苗和灭活疫苗。灭活疫苗的优点是病毒被杀死,没有散播疾病的危险。各种灭活剂,包括紫外线、福尔马林、氯仿或β-丙内酯等同样能灭活其它病毒。因此,制备疫苗的鸡胚如果混有病毒,也不会导致危险。灭活疫苗反应轻微,适用于雏鸡、初产母鸡和健康状态较差的鸡。灭活疫苗的免疫期短,不超过6个月。为了增强免疫效果,常在灭活疫苗中加入氢氧化铝和油类等佐剂。活疫苗有弱毒疫苗和中等毒力疫苗两类。?
(1) 弱毒疫苗
包括自然弱毒株,如F株(Ⅲ系苗)、B1株(Ⅱ系苗)、La Sota株(Ⅳ系苗)和V4株。这些毒株一般没有致病力,仅偶而致发轻微呼吸道症状和其它反应。弱毒疫苗对1日龄和幼龄雏鸡都能用。每只鸡接种的适宜剂量为106.5~107EID50。
(2) 中等毒力疫苗
最常用的毒株为I系苗、Roakin株、Komorov株、Hertfordshire株(Herts 33)和Mukteswar株。每只鸡的适宜剂量为105EID50,一般作肌肉注射。中等毒力疫苗的免疫效果良好,但不能用于8周龄以下的鸡。Roakin株是在美国分离到的自然流行毒株,而Komorov株则是强毒株通过雏鸭连续脑内传代而致弱的。Herts 33株和Mukteswar株是中等毒力疫苗中毒力最强的,将强毒株连续通过鸡胚致弱而成。所有中等毒力疫苗主要作加强免疫接种用。大多数活疫苗是用鸡胚制备的,并经冻干保存。弱毒株如B1常用滴眼或滴鼻接种,也可应用气雾免疫或将疫苗加于饮水中投与,随后再接种免疫力较强的LaSota疫苗。必须注意,La Sota株的毒力是弱毒疫苗中的最强者,易感雏鸡在接种后反应较重。因此不能用于4周龄以下的小鸡。如果流行的病毒毒力很强,应先用弱毒疫苗接种,随后再用中等毒力疫苗进一步加强免疫。中等毒力疫苗通常应用肌肉或翅部皮下接种,接种后可能引起轻微的症状,产生的保护力虽大于灭活疫苗,但不能排除恢复为强毒的危险,即使这种可能性很小。隐性带毒鸡的鸡蛋中有时带有NDV,如果应用这种鸡蛋制备弱毒疫苗,接种易感雏鸡,往往导致严重的暴发流行。因此,在没有本病流行的地区不应使用活疫苗。由于家禽的数量很大,预防接种花费的人力和时间都很可观,特别是重复接种。因此人们提出混合疫苗,例如将新城疫疫苗与传染性支气管炎疫苗和禽痘疫苗等制成联合疫苗。NDV能适应哺乳动物细胞,如牛和猪的肾单层细胞,因此可以培育弱毒疲备株和生产减毒疫苗,但免疫原性较差,必须应用注射接种法才能奏效。病毒在细胞培养物中的滴度低于鸡胚,因此目前活疫苗生产均用鸡胚。由于疫苗接种,母鸡体内常有高水平的NDV抗体,并能将抗体转移到卵泡中。孵化后,胚胎和雏鸡在发育阶段将卵黄中的免疫球蛋白吸收入体内,从而获得了被动免疫。因此这些雏鸡在出壳后5周内,对疫苗抗原的刺激应答极弱,形成的免疫力一般不超过5个月,甚至可能只有2个月或更短。为了克服这一困难,对于容易遭受新城疫感染威胁的雏鸡,应在出壳后几天内用弱毒疫苗接种。1日龄雏鸡接种疫苗的效果总不理想,雏鸡日龄越大,免疫效果越佳。为了获得足够的免疫力,要在4周龄时再用弱毒疫苗作第二次接种,这样可以在3~5个月内提供足够的保护力。种鸡可在8~10周龄和16~20周龄,以后每隔5个月再用灭活疫苗或者中等毒力疫苗接种。接种活疫苗不但有混入NDV或其它病毒的危险,而且可使其它呼吸道疾病的发病率增高,因为疫苗接种可能激发鸡群中潜在的病原体。通过实验研究,建议工厂化养鸡场应用B1或La Sota弱毒疫苗,根据各批雏鸡一日龄时的母源血凝抑制抗体水平,在监测的基础上确定最适首次免疫接种日龄。当雏鸡血凝抑制滴度降至1∶16时,进行第一次饮水免疫。25天后,再作第二次饮水免疫。再经60天后进行第三次气雾免疫,此后每隔120天气雾免疫一次。据云可使鸡群在整个生产周期始终保持有效的免疫状态。为保证安全起见,一周龄以内的雏鸡最好不用La Sota弱毒疫苗。必须强调指出,当免疫鸡接触自然野毒时,可能成为短暂的带毒者,但不显示临床症状。这些无症状的带毒鸡可能排出病毒,并在易感鸡群引起疾病暴发。随着集约化养鸡业的发展,新城疫免疫程序的研究日益受到重视。国内外很多学者都相继开展这方面的研究。从总体上看,新城疫的免疫保护水平受到母源抗体水平、疫苗种类、弱毒疫苗株的性质等因素的影响,不同的鸡场一般都应根据上述影响因素和鸡场具体情况,制定适于本场的免疫程序。现代分子生物学技术的应用,使人们对NDV的致病性和抗原性有了更新的了解,证明HN和F基因与二者有密切关系。采用基因工程技术已克隆了HN和F基因,并使其在病毒载体中表达,如痘苗病毒、鸡痘病毒、鸽痘病毒等,并证明F基因或HN基因重组活疫苗株免疫鸡对强毒攻击具有免疫保护力。其中F基因的重组鸡痘病毒疫苗,已进入区域应用试验阶段。以杆状病毒表达HN基因的亚单位疫苗也能诱导产生免疫保护性。由此可见,基因工程疫苗或亚单位疫苗,已成为新城疫疫苗的一个研究方向,开发应用前景十分广阔。 |
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